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产品名称：创伤弧菌 PCR 检测试剂盒
英文名称：PCR Detection Kit for Vibrio vulnificus
产品编号与包装规格：
| 编号 | 规格 |
|---|---|
| KJD14P | 24 测试/盒 |
产品简介：本试剂盒基于 PCR 技术，并适用于鱼、虾、蟹、贝类等水产品中创伤弧菌的检测。
检测原理：利用特异性引物和 PCR 反应所需其他试剂，如反应缓冲液、dNTPs 以及 Taq DNA 聚合酶等，加入待检 DNA 模板样品，即可进行PCR 扩增反应。经比对扩增产物目标条带即可判定创伤弧菌 vvhA 基因。
产品特点：
1. 快速简便：将酶、引物等反应组分混匀后进行干粉化处理，增加试剂稳定性，使用时减少溶液配制步骤，更为便捷，整个检测反应可在 3 h 内完成；
2. 特异性高：按照 GB 4789.44−2020《食品微生物学检验创伤弧菌检验》提供的目标基因引物，保证扩增反应的高度特异性；
3. 判读简单：扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和紫外仪观察目标条带即可判别，直观方便。
创伤弧菌 PCR 检测试剂盒产品组分：
储存条件与保质期：2~8℃条件下储存，有效期为 12 个月。
所需其他材料和适用仪器：
1、PCR 仪器、高速离心机、电泳仪、水平电泳槽、紫外仪、移液器、移液枪头及离心管等；
2、琼脂糖、溴化乙锭（EB）或其他核酸染料。
创伤弧菌 PCR 检测试剂盒使用指南：
1，样品前处理：
1) 参照 GB 4789.44−2020，取经 36℃±1℃培养 18 h±1 h 样品 PNCC 增菌液 1 mL 至无4 菌离心管中，12000 r/min 离心 2 min，弃上清，加入 30 μL 裂解液，充分悬浮，转移至 0.2 mL 无菌离心管中，轻弹管壁消除气泡，99℃加热 10 min；
2) 参照 GB 4789.44−2020，挑取可疑菌落半环到含 30 μL 裂解液的无菌离心管中，充分悬浮，轻弹管壁消除气泡，99℃加热10 min。
3) 12000 r/min 离心 15 min，上清即为粗提的 DNA，可转移至 0.2 mL 无菌离心管中，在-20℃下可长期保存。
2, 加样、反应
1) 首次使用时，分别加入 80 μL 超纯水至阳性对照和阴性对照管中，充分溶解，-20℃存储待用；
2) 取出干粉试剂，按照需求分别剪取 n 个检测试剂管（n=待检测样品数+1 管阳性对照+1 管阴性对照），每管加入 18 μL 复溶液，充分溶解后待用；
3) 向上述已加入复溶液的 n 个反应管中分别加入待测样品核酸、阴性对照、阳性对照各 2 μL，紧盖后置于 PCR 仪中按设定的反应程序进行扩增反应；
4) PCR 反应程序如下：
3, 结果判读：反应后每管中加入 4 μL 6×Loading buffer，混匀，并取 8 μL 经 1.5%琼脂糖凝胶电泳，在紫外仪下观察，阴性对照无条带扩增，阳性对照中出现目标条带（参照图 1），PCR试验结果成立。根据每个样品对应的反应产生的目标条带，即可判断创伤弧菌 vvhA 基因是否检出。若阴阳性对照管反应结果不符，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。
