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FZ014BF2 创伤弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48test
编号：FZ014BF2
规格：48测试/盒
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规格：20次×5
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规格： SmartCounter-4K/A(带电脑)
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HKD021 100bp DNA Ladder（DNA 标记）
编号：HKD021
规格：500μl（500μl×5）
产品名称：创伤弧菌核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
英文名称：PCR Detection Kit for Vibriovulnificus(Fluorescent Probe Assays)
产品编号与包装规格：
| 编号 | 规格 |
| FZ014BF2 | 48 测试/盒 |
产品简介：本试剂盒适用于食品中创伤弧菌的检测。
检测原理：基于Real Time PCR技术，利用针对于创伤弧菌特异性基因的引物、荧光探针以及其他反应所需试剂，加入待检样品即可进行扩增反应。在发生扩增过程中，荧光探针与目的基因片段结合，可被Taq酶分解并产生荧光信号，此时荧光定量PCR仪可识别该荧光信号，同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线，进而判定创伤弧菌是否检出。
创伤弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)产品组分：
储存条件与保质期：-20℃储存，有效期为12个月，避免反复冻融。
灵敏度：最低检验限达到 100 CFU/Test
所需其他材料和适用仪器：荧光定量PCR仪（具有能够检测FAM标记的荧光通道）、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。
创伤弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)使用指南：
1，样品前处理
1) 样品增菌液模板 DNA 的制备：
a) 样品增菌：参照NMKLNo.156《食品中致病性弧菌的检测和计数》，取样品20 g（mL），加入到盛有200 mL含3%氯化钠碱性蛋白胨水的无菌容器中均质，42±1℃培养18-24 h；
b) 吸增菌液1 mL到1.5 mL规格的无菌离心管中，6000 r/min离心5 min，弃上清，用50 μL无菌超纯水悬浮洗涤沉淀1-2次，6000 r/min离心5 min，完全去除上清；
c) 加入30 μL裂解液，充分悬浮菌体，轻弹管壁消除气泡，99℃加热10 min；
d) 12000 r/min离心15 min，上清即为粗提的DNA，可转移至0.2 mL无菌离心管中，在-20℃下可长期保存。
2) 可疑菌落模板 DNA 的制备：挑取可疑菌落，充分悬浮于预先加有30 μL裂解液的无菌离心管中，后按照上述步骤c)、d)操作。
2, 加样、反应
1) 按照需求取n个PCR反应管（n=1管阴性对照+待检测样品数+1管阳性对照），从试剂盒中取出预混液，充分融化，涡旋后短暂离心，以上每管加入20 μL预混液，待用。
2) 向上述n个反应管中分别加入阴性对照、待测样品DNA、阳性对照各5 μL，盖紧管盖，短暂离心，立即进行PCR扩增反应。
3) PCR反应体系为25 μL，取FAM检测通道，在反应阶段2中60℃时收集荧光信号，具体程序如下：
| 反应阶段 | 温度 | 时间 | 信号收集 | 循环数 |
| 1 | 95°C | 30 sec | 1 | |
| 2 | 95°C | 5 sec | } 40 | |
| 60°C | 30 sec | ✔ |
3, 结果：一般情况下，可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整，可根据所使用仪器的自身情况（如噪声等）以及选取的不同荧光通道进行调整。
1) 质量控制：阴性对照未出现明显的S型扩增曲线或Ct值＞35，阳性对照出现S型扩增曲线且其Ct值＜30。若阴阳性对照不同时满足上述条件，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。
2) 结果判读：（根据反应所得Ct值判读，具体见下表：）
| Ct值 | 结果判读 |
| ≤35 | 创伤弧菌阳性。 |
| 35~37 | 建议重新检测，若结果Ct≥37，则创伤弧菌阴性，反之则为创伤弧菌阳性。 |
| ≥37 | 创伤弧菌阴性。 |
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