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产品名称：溶藻弧菌核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
英文名称：PCR Detection Kit for Vibrio alginolyticus (Fluorescent Probe Assay)
产品编号与包装规格：
| 编号 | 规格 |
| FZ013BF2 | 48 测试/盒 |
产品简介：本试剂盒适用于食品、水产样本中溶藻弧菌的检测。
检测原理：基于Real Time PCR技术，针对溶藻弧菌特异性基因设计引物和荧光探针并优化反应所需试剂组分，加入待检样品核酸即可进行扩增反应。在扩增过程中，荧光探针与目的基因片段结合，可被Taq酶分解并产生荧光信号，此时荧光定量PCR仪可识别该荧光信号，同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线，进而判定溶藻弧菌是否检出。
溶藻弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)产品组分：
储存条件与保质期：-20℃储存，有效期为12个月，避免反复冻融。
灵敏度：最低检验限达到 100 CFU/Test
所需其他材料和适用仪器：荧光定量PCR仪（具有能够检测FAM标记的荧光通道）、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。
溶藻弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)使用指南：
1，样品前处理
1) 样品增菌液模板 DNA 的制备：
a) 样品增菌：参照NKML NO.156进行样品制备和增菌，取样品20g（mL），加入到含盐2％的200mL碱性蛋白胨水中42.0±1.0℃培养18±2h；
b) 吸增菌液1 mL到1.5 mL规格的无菌离心管中，6000 r/min离心5 min，完全去除上清；
c) 加入30 μL裂解液，充分悬浮菌体，轻弹管壁消除气泡，99℃加热10 min；
d) 12000 r/min离心15 min，上清即为粗提的DNA，可转移至0.2 mL无菌离心管中，在-20℃下可长期保存。
2) 可疑菌落模板 DNA 的制备：挑取可疑菌落，充分悬浮于预先加有30 μL裂解液的无菌离心管中，后按照上述步骤c)、d)操作。
2, 加样、反应
1) 按照需求取n个PCR反应管（n=待检测样品数+1管阴性对照+1管阳性对照），从试剂盒中取出预混液，充分融化，涡旋振荡后短暂离心，向以上每个PCR管中加入20 μL预混液。
2) 向上述n个反应管中分别按顺序加入阴性对照、待测样品DNA、阳性对照各5 μL，加样后立刻盖紧管盖，短暂离心，立即进行PCR扩增反应。
3) PCR反应体系为25 μL，设置FAM检测通道读取，在反应阶段2中60℃时收集荧光信号，具体程序如下：
| 反应阶段 | 温度 | 时间 | 信号收集 | 循环数 |
| 1 | 95°C | 30 sec | 1 | |
| 2 | 95°C | 5 sec | } 40 | |
| 60°C | 30 sec | ✔ |
3, 结果：一般情况下，可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整，可根据所使用仪器的自身情况（如噪声等）以及选取的不同荧光通道进行调整。
1) 质量控制：阴性对照未出现明显的S型扩增曲线或Ct值＞37，阳性对照出现S型扩增曲线且其Ct值＜30。若阴阳性对照不同时满足上述条件，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。
2) 结果判读：（根据反应所得Ct值判读，具体见下表：）
| Ct值 | 结果判读 |
| ≤35 | 溶藻弧菌阳性。 |
| 35~37 | 建议重新检测，若结果Ct≥37，则溶藻弧菌阴性，反之则为溶藻弧菌阳性。 |
| ≥37 | 溶藻弧菌阴性。 |
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