澳门·威斯尼斯(CHINA)官方网站-Global Leader

English

更新 | GB 4789.9-2014 空肠弯曲菌检验及注意事项

发布时间:2024-05-27      浏览次数:961    分享:

空肠弯曲菌的生物学特性

生物学特性:弯曲菌属是一类耐热微需氧菌,革兰氏染色阴性。弯曲菌体弯曲如小逗点状,菌体两端相接时呈“S”形、螺旋状或海鸥展翅状,菌体一端或两端有鞭毛,运动活泼,无芽孢。弯曲菌包括17个种和8个亚种,引起人类感染致病菌的弯曲菌中80%~90%都是空肠弯曲菌。

流行学特征:空肠弯曲菌广泛分布于自然界中,是人畜共患致病菌微生物,人类感染主要是以食用生的、未彻底加热的禽肉和消毒不充分的牛奶为主,卫生较差的地区则以水源性传播多见。临床表现为急性或自限性肠炎,症状和普通肠炎类似,20%以上患者会出现病情复发或病程延长现象,严重者会并发格林-巴利综合征。

空肠弯曲菌的检验

 

操作注意事项

1:对易产生较大颗粒的样品(如肉类、贝类)进行检测时,建议使用带滤网均质袋,以便均质后用吸管吸取匀液;
2:检测含乳制品时,均质后后应检测pH值。如有必要,用1mol/mL无菌NaOH或HCl调整pH值到7.5±0.2;
3:马尿酸钠水解实验和吲哚乙酸酯水解实验中,为保证实验结果的准确性,需要挑取培养状态良好的新鲜菌落,菌量应该足够大;
4:马尿酸钠水解实验中,加入茚三酮溶液后,不要震荡,36℃±1℃水浴或培养箱温浴10min后及时观察结果,不可放置时间太长,以免干扰结果判读;

培养基原理解析

1、Bolton肉汤

▶ 配方中乳白蛋白水解物、动物组织酶解物提供碳、氮源;酵母浸膏提供各种维生素;氯化钠维持均衡的渗透压;丙酮酸钠和偏亚硫酸氢钠能中和培养基的有毒物质,也能增强培养基的空气耐受力;a-酮戊二酸提供生长因子,促进空肠弯曲菌的生长;碳酸钠提供空肠弯曲菌最有利的酸碱环境;头孢派酮和多粘菌素B抑制革兰氏阴性菌;万古霉素和三甲氧苄胺嘧啶抑制革兰氏阳性菌;两性霉素B抑制酵母和真菌的生长。

2、改良CCD琼脂
▶ 配方中肉浸液、动物组织酶解物、酪蛋白酶解物提供碳、氮源、维生素、生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;木炭具有解毒、收集二氧化碳和改变表面张力的作用;去氧胆酸钠为选择性抑菌剂;头孢哌酮可抑制普通肠道菌生长、两性霉素B 抑制酵母和真菌生长、利福平可抑制非弯曲菌其他厌氧菌。硫酸亚铁和丙酮酸钠有利于空肠弯曲菌的生长;琼脂是培养基的凝固剂。
mCCD琼脂平板上的可疑空弯菌落通常为淡灰色,有金属光泽、潮湿扁平,呈扩散生长的倾向。

空肠弯曲菌为灰色菌落

3、Skirrow琼脂
▶ 配方中蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸膏提供碳、氮源、维生素、生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;丙酮酸钠、焦亚硫酸钠、硫酸亚铁有利于弯曲菌的生长。头孢呱酮可抑制革兰氏阴性细菌和部分革兰氏阳性菌、两性霉素B 抑制真菌生长、利福平可抑制非弯曲菌其他厌氧菌。琼脂是培养基的凝固剂。

空肠弯曲菌为灰色湿润单菌落或沿接种线扩散生长

4、哥伦比亚血琼脂
▶ 配方中动物组织酶解物、淀粉提供碳氮源、维生素和生长因子;羊血是细菌生长繁殖的良好营养物质。在45~50℃的基础培养基中加入血液可以保存血液中某些不耐热的生长因子,同时血球不被破坏。庆大霉素能抑制肠杆菌科和铜绿假单胞菌的生长。

空肠弯曲菌为灰色湿润沿接种线扩散生长菌落

 

5、氧化酶试验
▶ 原理:氧化酶使细胞色素C氧化,氧化型细胞色素C再氧化对苯二胺试剂形成紫色复合物,产生颜色反应。
▶ 操作:滴加1滴氧化酶试剂到一小块洁净滤纸上,用玻棒或接种环(铂或塑料)挑取适量新鲜菌苔涂在试剂润湿的纸片上;30秒内出现蓝紫色为阳性,延迟反应或无颜色变化为阴性。

 

6、过氧化氢酶试验
▶ 具有过氧化氢酶的细菌,能催化过氧化氢生成水和新生态氧,继而形成分子氧出现气泡。
▶ 操作:挑取一环菌落培养物,加到在干净显微镜玻片上的一滴3%过氧化氢溶液中,如果在30秒内出现气泡则判定结果为阳性。

过氧化氢酶阳性

 

7、马尿酸钠水解试验
▶ 原理:细菌具有马尿酸钠水解酶,可将马尿酸钠水解为甘氨酸和苯甲酸,甘氨酸可与茚三酮反应生成紫色化合物。
▶ 操作:挑取欲检测的菌落培养物,加到盛有0.4mL 1%的马尿酸钠的试管中制成菌悬液,注意不要带入培养基琼脂。混合均匀后在37℃水浴中温育2 h或36℃培养箱中温育4 h。轻轻地在马尿酸盐溶液的顶部加入0.2mL茚三酮溶液,不要振荡,在37℃水浴或36℃培养箱中温育10 min后判读结果。若出现黑紫色则为阳性;若出现淡紫色或没有颜色变化则为阴性。

马尿酸钠水解试验阳性

8、吲哚乙酸酯水解试验
▶ 挑取欲检测的菌落培养物,加到羟基吲哚醋酸盐纸片上面,再滴加一滴灭菌蒸馏水。如果吲哚乙酸脂水解,则在5~10min内出现深蓝色;若没有颜色变化则表示水解反应没有发生。

吲哚乙酸水解试验阳性

空肠弯曲菌的生化特性


质量控制及疑难解析

质量控制

1、实验室过程中,每批预增菌液、选择性增菌液、分离平板等都要做空白对照。以掌握检验过程中是否存在来自检验环境的污染。

2、定期使用空肠弯曲菌ATCC33291或相应定量活菌参考品,在P2实验室或阳性对照实验室内,用适当的食品样品进行阳性实验验证,污染剂量应控制在10-100CFU/25g,并进行记录,验证实验至少每2个月进行1次次。

疑难解析

问:空肠弯曲菌在mCCDA琼脂的形态是否仅限于正文所述?还有无其他形态?
答:空肠弯曲菌在mCCDA琼脂平板上的形态与在Skirrow琼脂平板上相似,但也有可能出现2种形态,一种为有光泽、潮湿、扁平菌落,呈扩散生长的倾向,另一种为分散凸起、有金属光泽的单个菌落,直径约为1~2mm。

问:在前增菌或选择性增菌结束后,肉汤未见微生物生长,是否可以终止实验?
答:不可以,因为肉汤可见的细菌浓度为107CFU/ml,在此浓度一下,肉眼不能发现微生物生长,但实际溶液中有微生物生长。 

所需培养基试剂

用途货号名称规格
增菌C-43圆底立式培养袋10个/包
C-22.5L 微需氧产气剂10袋/包
280250.1% 蛋白胨水250g
27380Bolton肉汤基础250g
SR0340Bolton肉汤配套试剂10支/盒
CP0570ABolton肉汤(含羊血,抗生素)100mL×6瓶
CP0571Bolton肉汤(含羊血,抗生素)225mL×6瓶
CP0211Bolton肉汤(含羊血,抗生素)10mL×20支
筛选及纯化27382改良CCD琼脂基础250g/瓶
SR0320改良CCD琼脂基础配套试剂10支/盒
CP0580改良CCD琼脂平板90mm×20/盒
27385Skirrow琼脂基础250g/瓶
SR0330Skirrow琼脂配套试剂10支/盒
CP0590Skirrow血琼脂平板90mm×20/盒
29010革兰氏染色液10mL×4瓶
29170氧化酶试纸10片/盒
24061哥伦比亚血琼脂250g/瓶
CP0160哥伦比亚血琼脂平板90mm×20/盒
生化鉴定291613%过氧化氢溶液2mL×10支
75770马尿酸盐20支/盒
29231茚三酮试剂10mL/瓶
SR0360吲哚乙酸酯纸片20片/盒

手机扫码收藏,查看更方便

GB4789.9

 

相关产品