产品名称:NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit
中文名称:NGS第二链cDNA合成试剂盒
产品编号与包装规格:
编号 | 产品名称 (点击名称进入下单页面) | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
HKN422系列 | NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit | 20次 | 100次 | crispr基因编辑(合成双链cDNA试剂盒) | — |
HKN422A | NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit | 20次 | 2220 | |
HKN422B | NGS第二链cDNA合成试剂盒 | 100次 | 9958 |
产品描述:NGS Second-Strand cDNA Synthesis kit 是一种在合成了 cDNA 第一链的基础上去除 RNA-DNA 杂合链中的 RNA 链,并合成 cDNA 第二链,最终形成双链 cDNA 的试剂盒。主要用于二代测 序(NGS)文库构建中 cDNA 第二链的合成。
产品特点:
1) 本试剂盒包含了进行 cDNA 第二链合成所需的各种试剂, 简便,高效;
2) 合成的双链 cDNA,可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、 cDNA 文库的构建等。
应用实例:
1、cDNA 第二链合成
模板:采用体外转录 RNA 为模板逆转录得到 810bp cDNA
M:DL2000;
泳道 1:逆转录得到 cDNA 第一链;
泳道 2:protein cDNA 第二链合成试剂盒得到 cDNA 第二链;
泳道 3:A 公司 cDNA 第二链合成试剂盒得到 cDNA 第二链;
2、cDNA 第二链合成产物酶切验证
DNase I 能消化 DNA-RNA 杂合链中的 DNA 和 dsDNA,而 RNase H 消化 DNA-RNA 杂合链中的 RNA,不消化 dsRNA。
M:DL2000;
泳道 1:cDNA 第一链;
泳道 2:cDNA 第一链+DNase I;
泳道 3:cDNA 第一链+RNaseH;
泳道 4:cDNA 第二链;
泳道 5:cDNA 第二链+DNase I;
泳道 6:cDNA 第二链+ RNaseH;
NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit 产品包装:
产品组成 | A包装 | B包装 |
NGS Second-Strand DNA Synthesis Enzyme Mix | 100μl | 500μl |
NGS Second-Strand cDNA Synthesis Reaction Buffer | 500μl | 1ml×3 |
RNase Free Water | 1ml×2 | 1ml×6 |
操作方法:
1,在冰上向已完成的 cDNA 第一链 20μl 反应体 系中依次加入如下试剂:
产品组成 | 体积 |
First-Strand Synthesis product | 20ul |
Second-Strand cDNA Synthesis Enzyme Mix | 5μl |
Second-Strand cDNA Synthesis Reaction Buffer | 20μl |
RNase free water | 55ul |
2,按上述体系轻轻混匀,随后离心沉淀液体。
3,16℃孵育 2 小时,热盖温度不超过 40℃。
4,75℃ 热 失 活 20min ; 或 加 入 5μl 0.5M EDTA(pH8.0)终止反应。
5,后续使用磁珠纯化、酚氯仿抽提、乙醇沉淀 等方法纯化合成的双链 cDNA,也可以使用 适应的 DNA 纯化试剂盒进行纯化。