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2×pEC-T vector Fast Ligation Mix（规格：20次 | 货号：HKT006-01A）
编号：HKT006-01A
规格：20次
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编号：022200
规格：250g/瓶
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编号：029100
规格：2mL×10支/盒
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编号：QSX002
规格：100片/盒
产品名称：2×pEC-T vector Fast Ligation Mix
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
| HKT006-01A | 2×pEC-T vector Fast Ligation Mix | 20次 | T载体 | 540 |
产品描述：
Easy Cloning T-vector 是一种PCR产物高效TA克隆的专用T载体。它由pBluescript II KS 载体改造而成：保留了pBluescript II KS 载体全部的酶切位点；PCR 产物插入位点处于多克隆酶切位点的中间，其两侧都有众多的酶切位点可供选择。
传统 T 载体在进行连接时的操作程序是：载体、片段、T4 DNA Ligase Buffer、T4 DNA Ligase。本制品是在传统模式上将除了插入片段的各成分进行预混，并使其在稳定性、转化子数目、阳性率方面不低于传统模式，使用时只需加入插入片段即可，大大简化了操作过程，降低了配制连接体系过程中的误差和污染率，节省了时间。
产品特点：
高效：快速连接，15 分钟即可完成连接反应。
稳定：-20℃取出反复冻融 20 次，克隆数目及阳性率不受影响。
快捷：只需加入插入片段再补充去热源水到 10μL 体系。
使用建议：
1）连接使用的 PCR 片段 3'端应带有 A 末端，如果是使 用 pfu 等高保真聚合酶扩增的不带 A 末端的平末端片段， 不可直接用于进行连接反应。
2）克隆时使用的 Insert DNA 片段（PCR 产物）建议进行切胶回收纯化，否则 PCR 产物中的短片段 DNA、残留引物等杂质都会影响 TA 克隆效率。
3）转化过程中建议使用Control Insert DNA做对照，以便在实验出现问题时确定原因。
保存温度：-20℃
2×pED-T vector Fast Ligation Mix 产品包装（A包装）：
质量保证：
Control Insert 克隆后的白色菌落中，有 90% 以上含有 Insert DNA 片段。
Control Insert 经克隆后，经测序确认''T''突出的存在。
操作方法：
1） 快速连接反应体系：
| 组分 | 体积 |
| 2×pEC-T vector Fast Ligation Mix (10 ng/μL) | 10μL |
| 目的PCR 片段/ Control Insert DNA | X μL/1μL |
| ddH2O | 至 20μL |
反应条件：16℃或 25℃下，保温15至30分钟。
注：保温5分钟也能正常进行连接反应，但反应效率略为降低。25℃下进行连接，其效果略差于16℃下连接效果。而更高的温度（>26℃）则较难形成环状DNA。
2) 取10μL加入至100μL感受态细胞中，用移液枪吹打混合，冰上放置30分钟。
3) 将离心管置于42℃水浴中，热激60-90秒，迅速将离心管置于冰上，放置2-3分钟。
4) 向每个离心管中加入500μL无菌不含抗生素的LB或SOC培养基中，37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟，使质粒上氨苄抗性基因表达，菌体复苏。
5）吸取 200μL 已转化的感受态细胞，加到含氨苄青霉素的 LB 或SOC 固体平板上，用无菌涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃培养箱里直至液体完全吸收，倒置培养 12-16 小时。
6） PCR 检测，利用试剂盒自带高速 PCR 扩增试剂 2×FastTaq Mast Mix 直接进行菌落PCR 鉴定。
pEC-T 结构图
| f1 (+) origin | 135–441 |
| LacZ alpha fragment | 451–832 |
| multiple cloning site | 653–776 |
| pUC origin | 1174–1841 |
| Amp resistance gene | 1992-2849 |
