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乳制品中单核细胞增生李斯特氏菌检验（GB 4789.30-2010）
发布时间：2014-11-28 浏览次数：4427 分享：
单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)简称单增李斯特菌，是一种人畜共患病的病原菌。国际上公认的李斯特菌共有十个菌株，而其中单增李斯特菌是唯一能引起人类疾病的菌株。单增李斯特菌进入人体是否得病，与菌量、宿主的免疫状态有关，因为该菌是一种细胞内寄生菌，宿主对它的清除主要靠细胞免疫功能，因此，新生儿、孕妇、40岁以上的成人，或免疫功能缺陷者很容易受到感染。健康成人个体感染后，单核细胞增多，会出现轻微类似流感症状；新生儿、孕妇、免疫缺陷患者感染后，表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产、脑膜炎、败血症等，直至死亡。
单增李斯特菌广泛存在于自然界中，它也是某些食物（主要是牛奶和乳制品，其他如肉类(特别是牛肉)；蔬菜；沙拉；海产品；冰淇凌等）中的一种污染物，能引起严重食物中毒。该菌能在2-42 ℃下生存(也有报道0 ℃能缓慢生长)，能在冰箱冷藏室内较长时间生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。
广东澳门·威斯尼斯网站科技有限公司长期从事微生物控制和检测的相关研究，是我国最早研究、开发食品微生物安全检测产品的厂家之一，对微生物检测试剂有着成熟的研发及生产经验。我公司针对目前乳制品行业及质量监测单位对单增李斯特菌检测的需求及情况，对单增李斯特菌检验相应的培养基进行了改进，使得单增李斯特菌检出率较之前有很大的改进。扩充并完善了相关的微生物检测试剂，使得技术操作人员能更准确、快捷的检测出目标菌。
单增李斯特菌为革兰氏阳性短杆菌,直或稍弯，两端钝圆，常呈V字型排列，偶有球状、双球状；兼性厌氧、无芽胞；一般不形成荚膜，但在营养丰富的环境中可形成荚膜；在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性；该菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脱落。该菌营养要求不高，在20-25 ℃培养有动力，穿刺培养2-5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。在的血平板上菌落中等大小，灰白色，可产生窄小的β-溶血环。
LB1与LB2中胰胨、多价胨和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；李斯特氏菌可耐受较高含量的氯化钠，同时对肠球菌起抑制作用；磷酸二氢钾和磷酸氢二钠为缓冲剂；七叶苷为可发酵的糖类；萘啶酮酸对革兰氏阴性杆菌的抑制性较强，而盐酸吖啶黄素对除李斯特氏菌的革兰氏阳性菌有较强的抑制作用，LB1与LB2两种培养基对两种药物的的配比进行了调整，一前一后进行选择性增菌，使得操作人员能顺利的将李斯特氏菌从样品中筛选出来。
李斯特氏菌虽对营养要求不高，但若营养不充分，在培养基上的菌落在接种后的一段时间内将难以用肉眼观察到，特别是对于刚刚复苏的菌株，而0.6 %酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSA-YE)能满足李斯特氏菌的营养要求， 一般情况下利用其做纯化培养；改良Mc Bride(MMA)琼脂及TSA-YE上，用45°角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。其成分中甘氨酸、氯化锂、苯乙醇和复达欣可抑制非李斯特氏菌以外的部分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，但MMA抑制性过强，对李斯特氏菌的生长也有一定影响，所以其平板上菌落较小、形态不典型，很难与杂菌区分，因此，根据长期使用经验及实验结果结合参考文献，很多标准进行了修订,采用PALCAM和单增李斯特菌显色培养基对李斯特氏菌进行平板分离。
PALCAM琼脂中，蛋白胨提供生长必须的碳氮源；酵母膏粉和淀粉提供碳氮源、维生素和生长因子；氯化钠可维持均衡的渗透压；葡萄糖提供碳源；李斯特氏菌水解七叶苷与铁离子反应形成黑色的6,7-二羟基香豆素；甘露醇是可发酵的糖，酚红是pH指示剂；氯化锂和其它的抗生素能抑制革兰氏阴性菌和大多数革兰氏阳性菌。李斯特氏菌在PALCAM平板上生长24h后菌落呈黑色，直径为1mm，在其周围形成一个黑色环，培养48h，菌落仍呈黑色，直径2mm～3mm，除在菌落周围有一环外，在菌落中心部位的深层也形成黑点。
李斯特菌显色培养基中，利用李斯特氏菌中特有的酶类及其作用，使不同的菌种显现出不同的菌落形态，澳门·威斯尼斯网站CRM014李斯特显色培养基中—单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)显蓝色，菌落周围有一不透明环，英诺克李斯特氏菌（Listeria innocua）在该培养基中同样显蓝色，但菌落周围无不透明环。
|
培养基：PALCAM琼脂 |
培养基：李斯特显色培养基 |
依据GB 4789.30-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验，我公司推出了一套单核细胞增生李斯特氏菌检验解决方案，为生产企业及检验单位提供方便。
图1：GB 4789.30-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验流程图
表1：实验操作所用培养基及生化试剂
功能阶段
|
实验
|
产品序号
|
产品名称
|
规格
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类别
|
增菌
|
1
|
CP0490
|
LB1增菌液
|
225mL×6瓶
|
盒（瓶装）
|
026040
|
李氏增菌肉汤（LB1、LB2）基础
|
250g
|
瓶（干粉）
| ||
SR0100
|
李氏增菌肉汤LB1配套试剂
|
10支
|
盒（西林瓶）
| ||
2
|
CP0500
|
LB2增菌液
|
225mL×6瓶
|
盒（瓶装）
| |
026040
|
李氏增菌肉汤（LB1、LB2）基础
|
250g
|
瓶（干粉）
| ||
SR0110
|
李氏增菌肉汤LB2配套试剂
|
10支
|
盒（西林瓶）
| ||
平板分离
|
3
|
026070
|
PALCAM琼脂培养基
|
250g
|
瓶（干粉）
|
SR0140
|
PALCAM琼脂配套试剂
|
10支
|
盒（西林瓶）
| ||
4
|
CRM014
|
李斯特菌显色培养基
|
1000 mL
|
瓶（干粉）
| |
CRM014 P1
|
李斯特菌显色培养基平板
|
90mm×20
|
盒（平板）
| ||
初筛
|
5
|
075070
|
木糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
|
6
|
075110
|
鼠李糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
7
|
026020
|
胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂（TSA-YE）
|
250g
|
瓶（干粉）
| |
026020A
|
胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂平板（TSA-YE）
|
90mm×20
|
盒（平板）
| ||
生理生化
|
8
|
029010
|
革兰氏染色液
|
10ml×4瓶
|
盒
|
10
|
075660
|
SIM培养管（SIM动力培养基）
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
026050
|
半固体琼脂
|
250g
|
瓶（干粉）
| ||
075350A
|
半固体琼脂
|
10 ml×20支
|
盒（管装）
| ||
075350
|
半固体琼脂
|
20支
|
盒（西林瓶）
| ||
11
|
029161
|
过氧化氢酶试剂
|
2 mL/支×10
|
盒
| |
12
|
075010
|
葡萄糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
13
|
075030
|
麦芽糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
14
|
075040
|
甘露醇
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
15
|
075070
|
木糖
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
16
|
075140
|
七叶苷
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
17
|
075250
|
葡萄糖磷酸盐胨水
|
20支
|
盒（西林瓶）
| |
029040
|
甲基红试剂
|
10 mL
|
瓶
| ||
029050
|
VP试剂
|
10 ml×2
|
盒
| ||
18
|
024070
|
血平板（成品培养基）
|
90mm×20
|
盒（平板）
| |
024060
|
血琼脂基础
|
250g
|
瓶（干粉）
| ||
19
|
ATCC 6538
|
金黄色葡萄球菌
|
|
盒（西林瓶）
| |
ATCC 25923
|
金黄色葡萄球菌
|
|
盒（西林瓶）
| ||
CMCC(B) 26003
|
金黄色葡萄球菌
|
|
盒（西林瓶）
| ||
20
|
071820
|
单核增生性李斯特氏菌生化鉴定盒
|
10种×10次
|
盒（西林瓶）
| |
21
|
HK-MID-67
|
HK-MID-Listeria李斯特氏菌鉴定系统
|
10 tests
|
盒
| |
选作项目
| |||||
生理生化
|
22
|
026010
|
胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤（TSB-YE）
|
250g
|
瓶（干粉）
|
SR0090
|
EB增菌液配套试剂
|
10支
|
盒（西林瓶）
|
在日常生活汇总，由于单增李斯特氏菌在4℃下仍然能生长繁殖，所以冰箱食品需加热后再食用，防止食物中毒的危险，
在食品生产行业中，单增李斯特氏菌在一般热加工处理中能存活，热处理已杀灭了竞争性细菌群，使单增李斯特氏菌在没有竞争的环境条件下易于存活，所以在食品加工中，中心温度必须达到70℃持续2分钟以上。
相关国标下载地址：
GB 4789.30-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验 |
http://www.huankai.com/Train/HBdetail_105020015_100000035133931.html |
