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产品名称：副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
英文名称：Rapid Detection Kit for pathogenic Vibrio parahaemolyticus（TDH/TRH gene）(Fluorescent Probe Assays)
产品编号与包装规格：
| 编号 | 规格 |
|---|---|
| FZ008BF2-A | 48 测试/盒 |
产品简介：本试剂盒适用于水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的副溶血性弧菌的快速定性检测以及耐热直接溶血素(thermostable direct hemolysin，TDH)、耐热直接溶血素相关溶血素 (thermostable direct hemolysin-related hemolysin，TRH)毒力基因的检测。其他菌种检验需另按照国标《GB4789.7-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》开展。
检测原理：基于 Real Time PCR 技术，利用针对于副溶血性弧菌和毒力基因 TDH 和 TRH 特异性基因的引物、荧光探针以及其他反应所需试剂，加入待检样品即可进行扩增反应。在发生扩增过程中，荧光探针与目的基因片段结合，可被Taq 酶分解并产生荧光信号，此时荧光定量PCR 仪可识别该荧光信号，同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线，进而判定副溶血性弧菌和毒力基因是否检出。
副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）产品组分：
储存条件与保质期：-20℃避光储存，有效期为 12 个月，避免反复冻融。
灵敏度：单通道最低检验限达到 100 CFU/Test。
所需其他材料和适用仪器：荧光定量 PCR 仪（具有能够检测 FAM、VIC、CY5 标记的荧光通道）、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。
副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）使用指南：
1，样品前处理：
1) 样品增菌液模板 DNA 的制备：
a) 取 25 g(mL)待检样品，置于 225 mL 3%氯化钠碱性蛋白胨水中，36 ℃±1 ℃前增菌8~18 h。
b) 取以上增菌液 1 mL 到 1.5 mL 规格的无菌离心管中，6000 r/min 离心 5 min，完全去除上清；
c) 加入 30 μL 裂解液充分悬浮管底沉淀，轻弹管壁消除气泡，99℃加热 10 min。
d) 12000 r/min 离心 15 min，上清即为待测样品 DNA，静置冰上，长时间不用应再次离心。
2) 可疑菌落模板 DNA 的制备：挑取可疑菌落，充分悬浮于预先加有 30 μL 裂解液的无菌离心管中，后按照上述步骤 c)、d)操作。
2, 加样、反应
1) 按照需求取 n 个 PCR 反应管（n=1 管阴性对照+待检测样品数+1 管阳性对照），从试剂盒中取出预混液，充分融化，涡旋后短暂离心，以上每管加入20 μL预混液，待用。
2) 向上述 n 个反应管中分别加入阴性对照、待测样品 DNA、阳性对照各 5 μL，总反应体积为 25 μL。盖紧管盖，短暂离心，立即进行 PCR 扩增反应。
3) PCR 反应体系为 25 μL，取 FAM、VIC、Cy5 检测通道，在反应阶段 2 中 60℃时收集荧光信号，具体程序如下：
注：在反应阶段 2 中 60℃时收集荧光信号，对于多通道荧光 PCR 仪，取荧光素“FAM、VIC 和 CY5”为信号采集通道，淬灭基团选择“None”，染料校正选择“None”。另外，这 3 个荧光通道分别对应副溶血性弧菌特异性基因、TRH 和 TDH 基因的检测。
3, 结果：一般情况下，可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整，可根据所使用仪器的自身情况（如噪声等）以及选取的不同荧光通道进行调整。
1) 质量控制：阴性对照未出现明显的 S 型扩增曲线或Ct 值＞35，阳性对照出现 S 型扩增曲线且其 Ct 值＜30。若阴阳性对照不同时满足上述条件，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。
2) 结果判读：（根据反应所得 Ct 值判读，具体见下表：）
