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FZ008BF2-A 副溶血性弧菌(TDH/TRH 基因)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48test

英文名称:Rapid Detection Kit for pathogenic Vibrio parahaemolyticus(TDH/TRH gene)(Fluorescent Probe Assays)

货 号 :FZ008BF2-A

规 格 :48 测试/盒

用途:本试剂盒适用于水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的副溶血性弧菌的快速定性检测……

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产品名称:副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
英文名称:Rapid Detection Kit for pathogenic Vibrio parahaemolyticus(TDH/TRH gene)(Fluorescent Probe Assays)

产品编号与包装规格:

编号规格
FZ008BF2-A48 测试/盒

产品简介:本试剂盒适用于水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的副溶血性弧菌的快速定性检测以及耐热直接溶血素(thermostable direct hemolysin,TDH)、耐热直接溶血素相关溶血素 (thermostable direct hemolysin-related hemolysin,TRH)毒力基因的检测。其他菌种检验需另按照国标《GB4789.7-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》开展。

检测原理:基于 Real Time PCR 技术,利用针对于副溶血性弧菌和毒力基因 TDH 和 TRH 特异性基因的引物、荧光探针以及其他反应所需试剂,加入待检样品即可进行扩增反应。在发生扩增过程中,荧光探针与目的基因片段结合,可被Taq 酶分解并产生荧光信号,此时荧光定量PCR 仪可识别该荧光信号,同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线,进而判定副溶血性弧菌和毒力基因是否检出。

副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)产品组分:

副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)产品组分

储存条件与保质期:-20℃避光储存,有效期为 12 个月,避免反复冻融。

灵敏度:单通道最低检验限达到 100 CFU/Test。

所需其他材料和适用仪器:荧光定量 PCR 仪(具有能够检测 FAM、VIC、CY5 标记的荧光通道)、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。

副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)使用指南:

1,样品前处理

1) 样品增菌液模板 DNA 的制备:
   a) 取 25 g(mL)待检样品,置于 225 mL 3%氯化钠碱性蛋白胨水中,36 ℃±1 ℃前增菌8~18 h。
   b) 取以上增菌液 1 mL 到 1.5 mL 规格的无菌离心管中,6000 r/min 离心 5 min,完全去除上清;
   c) 加入 30 μL 裂解液充分悬浮管底沉淀,轻弹管壁消除气泡,99℃加热 10 min。
   d) 12000 r/min 离心 15 min,上清即为待测样品 DNA,静置冰上,长时间不用应再次离心。

2) 可疑菌落模板 DNA 的制备:挑取可疑菌落,充分悬浮于预先加有 30 μL 裂解液的无菌离心管中,后按照上述步骤 c)、d)操作。

2, 加样、反应

   1) 按照需求取 n 个 PCR 反应管(n=1 管阴性对照+待检测样品数+1 管阳性对照),从试剂盒中取出预混液,充分融化,涡旋后短暂离心,以上每管加入20 μL预混液,待用。
   2) 向上述 n 个反应管中分别加入阴性对照、待测样品 DNA、阳性对照各 5 μL,总反应体积为 25 μL。盖紧管盖,短暂离心,立即进行 PCR 扩增反应。
   3) PCR 反应体系为 25 μL,取 FAM、VIC、Cy5 检测通道,在反应阶段 2 中 60℃时收集荧光信号,具体程序如下:

    注:在反应阶段 2 中 60℃时收集荧光信号,对于多通道荧光 PCR 仪,取荧光素“FAM、VIC 和 CY5”为信号采集通道,淬灭基团选择“None”,染料校正选择“None”。另外,这 3 个荧光通道分别对应副溶血性弧菌特异性基因、TRH 和 TDH 基因的检测。

3, 结果:一般情况下,可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整,可根据所使用仪器的自身情况(如噪声等)以及选取的不同荧光通道进行调整。

   1) 质量控制:阴性对照未出现明显的 S 型扩增曲线或Ct 值>35,阳性对照出现 S 型扩增曲线且其 Ct 值<30。若阴阳性对照不同时满足上述条件,则本次检测结果无效,应重新检测或与产品技术支持联系。

   2) 结果判读:(根据反应所得 Ct 值判读,具体见下表:)

副溶血性弧菌 (TDH/TRH 基因)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)结果判读