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HKV207-01A Biotin Competent Cell（感受态细胞）
编号：HKV207-01A
规格：100μl×10支
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编号：00500500
规格：500ml
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编号：HKM017系列
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规格：MFS-6A-500-K(Φ47mm，500ml，六联，含泵SZKB-6BS)
产品名称：Biotin Competent Cell
中文名称：Biotin 感受态细胞
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
| HKV207-01A | Biotin Competent Cell | 100μl×10支 | 感受态细胞 | 620 |
产品描述：
Biotin 修饰的蛋白质是用于蛋白质相互作用研究中的有力工 具，通过目标蛋白融合表达 Avi Tag，可实现位点特异性的 Biotin 修饰，可最大限度的减少对蛋白质活性的影响。Avi Tag 的 Biotin 修 饰 可 以 在 体 内 或 体 外 （ Avi-Biotinylation Kit ， Cat.No ： HKPE013）进行。Biotin Competent Cell 是含有高表达 Avi Tag 生 物 素 化 酶 的 BL21 （ DE3 ） 感 受 态 细 胞 。 配 合 使 用 pAvi-C （Cat.No：HKV104）载体可获得最佳生物素修饰效果。
注意：宿主菌为氯霉素抗性。
产品特点：
高效表达 Avi Tag 生物素化酶。
实现目标蛋白 Biotin 修饰。
基因型：E.coli BL21（DE3）来源于 B 株，为 Lon 蛋白水解酶、ompT 外膜蛋白水解酶缺陷型。
转化效率：使用 pUC19 质粒检测，转化效率≥1×10⁶cfu/μg。
保存温度：-70℃
Biotin Competent Cell 产品包装（A包装）：
| 产品组成 | 体积 |
| Biotin Competent Cell | 100μl×10 |
| Control DNA pUC19(1ng/μl) | 10μl |
操作方法：
1）取感受态细胞置于冰浴中，一次转化感受态细 胞的用量为 50-100μl，可根据实际情况分装使用。所 用 DNA 的体积不要超过感受态细胞的十分之一，以下 实验以 100μl 感受态细胞为例。
2）待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加 入目的 DNA（通常 100μl 感受态细胞能够被 1ng 超螺 旋质粒 DNA 所饱和），用移液枪吹打混合，冰上放置 30 分钟。
3）将离心管置于 42℃水浴中，热击 60-90 秒，迅 速将离心管置于冰上，放置 2-3 分钟。
4）向每个离心管中加入 500μl 无菌不含抗生素的 LB 或 SOC 培养基中，37℃摇床，150rpm 振荡培养 45 分钟，使质粒上相关抗性基因表达，菌体复苏。
5）吸取 200μl 已转化的感受态细胞，加到含氯霉 素和质粒上相应抗生素的 LB 或 SOC 固体平板上，用 无菌涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃培养箱 里直至液体完全吸收，倒置培养 12~16 小时。涂布量 应根据具体实验调整，如果转化的 DNA 总量较多，可 取少量转化产物涂布平板，如果预计的克隆数较少， 可 3000rpm 离心 5 分钟，吸取部分培养基，悬浮菌体 后涂布在一个平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰 箱中保存，如果第二日转化菌落数过少，可以将剩余 菌液再涂布在新的平板上。
注意事项：
1）感受态细胞应保存于-70℃冰箱中，不可反复 冻融，或放置时间过长，避免感受态转化效率降低。
2）实验操作时，应注意无菌条件。
3）实验过程中，可保留部分连接反应液，当转化 不成功时，可重新转化。
