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HKT003系列 Easy Cloning T-vector (pEC-T)
编号：HKT003系列
规格：20次 | 20次×5
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027400 橙血清琼脂培养基 250g/瓶
编号：027400
规格：250g/瓶
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HP005E 沙门氏菌增菌液培养基 500g/瓶
编号：HP005E
规格：500g/瓶
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Fast Pfu DNA Polymerase(with dNTP)（规格：250U | 货号：HKE031-01A）
编号：HKE031-01A
规格：250U
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0.1%蛋白胨水(2020版药典) 250g/瓶
编号：028026
规格：250g/瓶
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HKV103-01A pGST-TEV Expression Kit
编号：HKV103-01A
规格：1μg/20次
产品名称：Easy Cloning T-vector (pEC-T)
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
| HKT003-01A | Easy Cloning T-vector (pEC-T) | 20次 | T载体 | 540 |
| HKT003-01B | 20次×5 | 2398 |
产品描述：
Easy Cloning T-vector是一种PCR 产物高效TA克隆的专用 T载体。它由pBluescript II KS 载体改造而成：保留了pBluescript II KS 载体全部的酶切位点；PCR 产物插入位点处于多克隆酶 切位点的中间，其两侧都有众多的酶切位点可供选择。
由于本载体以 pBluescript II KS 载体为基础构建而成，所以 它具有同pBluescript II KS 载体相同的功能：PCR 产物插入后可 以利用α-互补性进行蓝白斑筛选，挑选阳性克隆。可以用 M13 通用引物和T7，T3 启动子引物对PCR 产物进行测序。含有 T7 及T3RNA 聚合酶的启动子，可以对插入片段进行体外转录。
产品特点：提供 2×快速连接系统（15 分钟即可完成连接反应）及 10× 传统型连接系统（过 夜连接可获得最佳连接效果），具体使用说 明见后。
使用建议：
1）连接使用的PCR片段3' 端应带有A末端，如果是使用Pfu等 高保真聚合酶扩增的不带A末端的平末端片段，不可直接用于 进行连接反应。
2）克隆时使用的Insert DNA片段（PCR产物）建议进行切胶 回收纯化，否则PCR产物中的短片段DNA、残留引物等杂质都 会影响TA克隆效率。
3）转化过程中建议使用 Control Insert DNA 做对照，以便在实 验出现问题时确定原因。
保存温度：-20℃
Easy Cloning T-vector (pEC-T) 产品包装（A包装）：
质量保证：
Control Insert 克隆后的白色菌落中，有 90%以上含 有Insert DNA 片段。
Control Insert 克隆后，经测序确认''T''突出的存在。
操作方法：
1） 选择合适的连接体系（详细介绍见背面）。
2） 取10 μL 加入至 100 μL 感受态细胞中，用移 液枪吹打混合，冰上放置30 分钟。
3） 将离心管置于 42℃水浴中，热激 60-90 秒，迅 速将离心管置于冰上，放置 2-3 分钟。
4） 向每个离心管中加入 500μL 无菌不含抗生素的 LB 或SOC 培养基中，37℃摇床，150rpm 振荡培养 45 分钟，使质粒上氨苄抗性基因表达，菌体复苏。
5） 吸取200μL 已转化的感受态细胞，加到含氨苄 青霉素的 LB 或SOC 固体平板上，用无菌涂布棒将细 胞均匀涂开，将平板置于 37℃培养箱里直至液体完全 吸收，倒置培养 12-16 小时。
6） PCR检测，利用试剂盒自带的高速PCR扩增试 剂2×FastTaq Mast Mix直接进行菌落PCR鉴定。
A、常规连接反应体系（20μL）
| 组分 | 体积 |
| 10×Ligation Buffer | 2μL |
| pEC-T vector（25 ng/μL） | 2μL |
| 目的PCR 片段/ Control Insert DNA | X μL/1 μL |
| T4 DNA Ligase | 1μL |
| ddH2O | 至 20μL |
反应条件：
1）16℃保温 3 小时以上或过夜。 2）在4℃保温过夜，或室温数小时，但反应效率较16℃过夜略低。 实践表明连接反应的温度越低，达到理想连接效率所需时间越长，温度 较高则所需时间较短。
注：10×Ligation Buffer融化时，如果出现少量沉淀属正常现象，请 于37℃溶解混匀后使用。
B、 快速连接反应体系：
| 组分 | 体积 |
| 2×Quick Ligation Buffer | 10μL |
| pEC-T vector（25 ng/μL） | 2μL |
| 目的PCR 片段/ Control Insert DNA | X μL/1 μL |
| T4 DNA Ligase | 1μL |
| ddH2O | 至 20μL |
反应条件：
1）16℃ 或 25℃下，保温15至30分钟。
2）保温5分钟也能正常进行反应，但反应效率略为降低。 25℃下进行连接，其效果略差于16℃下连接效果。而更高 的温度（>26℃）则较难形成环状DNA。连接效率偏低时， 可适当延长连接反应时间，但过长的连接时间（如数小时） 连接效果反而会变差。一些较难连接的片段（如大片段）， 请采用传统型10×T4 DNA Ligation Buffer体系进行尝试。
