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HKT002系列 Easy Digestion T-vector(pED-T)
编号：HKT002系列
规格：20次 | 20次×5
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0.1%蛋白胨水(2020版药典) 250g/瓶
编号：028026
规格：250g/瓶
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024065 胰酪胨大豆羊血(TSSB)琼脂基础 250g/瓶
编号：024065
规格：250g/瓶
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6孔细胞培养板（平底，9.60cm²）
编号：202202006TC
规格：6孔,9.60cm²（80/箱）
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10倍浓缩3%氯化钠碱性蛋白胨水 50mL×10袋
编号：C25015D4
规格：50mL×10袋
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024089 营养琼脂平板(NA培养基) 90mm×20个
编号：024089
规格：90mm×20个/盒
产品名称：Easy Digestion T-vector(pED-T)
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
| HKT002-01A | Easy Digestion T-vector(pED-T) | 20次 | T载体 | 540 |
| HKT002-01B | 20次×5 | 2398 |
产品描述：
Easy Digestion T-vector是一种PCR产物高效TA克隆的专 用T载体，它由pTZ19R 载体改造而成。Easy Digestion T- vector在插入位点两端特别设计了两个BamH I位点，使插入片 段可以用BamH I单酶切检测及亚克隆，另外还可以使用非常廉 价和高效的EcoR I与Hind III双酶切检测及亚克隆。
Easy Digestion T-vector 保留了pTZ19R 载体的所有功能： PCR 产物插入后可以利用 α-互补性进行蓝白斑筛选，挑选阳性 克隆；可以用M13F、M13R 通用引物对PCR 产物进行测序；含 有T7 RNA 聚合酶的启动子，可以对插入片段进行体外转录。
产品特点：提供 2×快速连接系统（15 分钟即可完成连接反应）及 10×传统 型连接系统（过夜连接可获得最佳连接效果），具体使用说明见 后。
使用建议：
1）连接使用的PCR片段3' 端应带有A末端，如果是使用Pfu等 高保真聚合酶扩增的不带A末端的平末端片段，不可直接用于 进行连接反应。
2）克隆时使用的Insert DNA片段（PCR产物）建议进行切胶 回收纯化，否则PCR产物中的短片段DNA、残留引物等杂质都 会影响TA克隆效率。
3）转化过程中建议使用 Control Insert DNA 做对照，以便在实 验出现问题时确定原因。
保存温度：-20℃
Easy Digestion T-vector(pED-T) 产品包装（A包装）：
质量保证：
Control Insert 克隆后的白色菌落中，有90%以上含 有Insert DNA 片段。
Control Insert 克隆后，经测序确认''T''突出的存在。
操作方法：
1） 选择合适的连接体系（详细介绍见背面）。
2） 取10μL 加入至 100μL 感受态细胞中，用移液 枪吹打混合，冰上放置30 分钟。
3） 将离心管置于 42℃水浴中，热击 60-90 秒，迅 速将离心管置于冰上，放置 2-3 分钟。
4） 向每个离心管中加入 500μL 无菌不含抗生素的 LB 或SOC 培养基中，37℃摇床，150rpm 振荡培养 45 分钟，使质粒上氨苄抗性基因表达，菌体复苏。
5） 吸取200μL 已转化的感受态细胞，加到含氨苄 青霉素的 LB 或SOC 固体平板上，用无菌涂布棒将细 胞均匀涂开，将平板置于 37℃培养箱里直至液体完全 吸收，倒置培养 12-16 小时。
6） PCR检测，利用试剂盒自带的高速PCR扩增试 剂2×FastTaq Mast Mix直接进行菌落PCR鉴定。
A、常规连接反应体系（20μL）
| 组分 | 体积 |
| 10×Ligation Buffer | 2μL |
| pED-T vector（25 ng/μL） | 2μL |
| 目的PCR 片段/ Control Insert DNA | X μL/1 μL |
| T4 DNA Ligase | 1μL |
| ddH2O | 至 20μL |
反应条件：
1）16℃保温 3 小时以上或过夜。
2）在4℃保温过夜，或室温数小时，但反应效率较16℃过夜略 低。实践表明连接反应的温度越低，达到理想连接效率所需时间越 长，温度较高则所需时间较短。
注：10×Ligation Buffer融化时，如果出现少量沉淀属正常现 象，请于37℃溶解混匀后使用。
B、 快速连接反应体系：
| 组分 | 体积 |
| 2×Quick Ligation Buffer | 10μL |
| pED-T vector（25 ng/μL） | 2μL |
| 目的PCR 片段/ Control Insert DNA | X μL/1 μL |
| T4 DNA Ligase | 1μL |
| ddH2O | 至 20μL |
反应条件：
1）16℃ 或 25℃下，保温15至30分钟。
2）保温5分钟也能正常进行反应，但反应效率略为降 低。25℃下进行连接，其效果略差于16℃下连接效果。而 更高的温度（>26℃）则较难形成环状DNA。连接效率偏 低时，可适当延长连接反应时间，但过长的连接时间（如数 小时）连接效果反而会变差。一些较难连接的片段（如大 片段），请采用传统型10×T4 DNA Ligation Buffer体系进行 尝试。
