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TQ001D0 细菌基因组DNA纯化试剂盒(硅胶膜柱法) 50test
编号：TQ001D0
规格：50 份/盒
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编号：028037P1
规格：250g/瓶
产品名称：细菌基因组DNA纯化试剂盒（硅胶膜柱法）
英文名称：Bacterial DNA purification kit（Silica membrane）
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品类型 | 规格 |
|---|---|---|
| TQ001D0 | 分子试剂 | 50 份/盒 |
产品简介：用于细菌基因组DNA的小量提取，其原理是利用细胞裂解释放基因组DNA；随后利用蛋白酶K降解膜蛋白和缠绕DNA的核蛋白，使DNA充分游离；硅胶膜离心过滤可逆吸附基因组DNA；洗除蛋白质、脂质等杂质后，用洗脱液洗脱获得高纯度基因组DNA。使用本试剂盒提取的DNA可用于各种常规分子实验操作，包括酶切、PCR、分子杂交等实验。
储存条件及有效期：室温保存，有效期一年，2~8℃条件下储存更佳。储存过程中若溶液产生沉淀，使用前将其在室温放置一段时间或37℃条件下温育，待充分溶解后摇匀即可使用。
溶菌酶和蛋白酶K溶解后，和RNase一起-20℃存放。
样本类型：新鲜细菌培养液或菌落悬浮液。
细菌基因组DNA纯化试剂盒(硅胶膜柱法)试剂盒组成：
| 序号 | 产品组成 | 规格 |
| 1 | 悬浮液 | 17.5 mL |
| 2 | 裂解液 | 15 mL |
| 3 | 去蛋白缓冲液 | 24 mL（使用前加16 mL无水乙醇） |
| 4 | 漂洗液 | 15 mL（使用前加60 mL无水乙醇） |
| 5 | 洗脱液 | 10 mL |
| 6 | DNA硅胶膜吸附柱 | 50 套 |
| 7 | 蛋白酶K | 干粉 |
| 8 | 蛋白酶K配置液 | 1 mL |
| 9 | 溶菌酶 | 干粉 |
| 10 | 溶菌酶配置液 | 4 mL |
| 11 | RNase | 220 μL |
| 12 | 使用说明书 | 1份 |
提取得率：1 mL纯培养菌液对数生长期的菌液（107~109 cells）基因组DNA的提取量分别为：革兰氏阴性菌6~25 μg，革兰氏阳性菌为6~15 μg；OD260/280=1.7~1.9。
细菌基因组 DNA 纯化试剂盒（硅胶膜柱法）使用方法：
● 初次使用前请在去蛋白缓冲液和漂洗液中加入无水乙醇，参见瓶身标签或使用说明书。
● 将蛋白酶K的粉末倒入蛋白酶K配置液中，涡旋振荡充分混匀，浓度为20 mg/mL。
● 将溶菌酶干粉倒入溶菌酶配置液瓶中，涡旋振荡充分混匀，浓度为20 mg/mL。
1，吸取1~2 mL对数生长期细菌培养液于1.5 mL离心管中。12,000 r/min离心1 min，尽量吸除上清。
2，中收集的菌体沉淀加入120 μL悬浮液，充分悬浮后加入80 μL溶菌酶和4 μL RNase A 溶液，震荡混匀后，37℃水浴10~30 min。
● （革兰氏阴性菌水浴10~15 min，革兰氏阳性菌水浴20~30 min；若是难提取的葡萄球菌属细菌可加入1 μL 溶葡酶 （20 mg/mL）一起水浴。溶葡酶需客户自行购买）
● 对于难裂解的细菌如芽孢杆菌和葡萄球菌等，可把悬浮液用量增加至320 μL，和酶水浴后，加入200 mg左右玻璃珠（0.1~0.2 mm）高速涡旋10 min以进一步裂解细菌。静置1 min，取200 μL上清液至新的离心管中，再进行下一步。（玻璃珠需客户自行购买）
3，加入220 μL裂解液和20 μL蛋白酶K，立即涡旋振荡混匀，65℃~70℃水浴或金属浴10~15 min，溶液形成清亮的悬浮液。
● 先加裂解液再加蛋白酶K，避免蛋白酶K活性减弱。
● 裂解液加入后会产生白色沉淀，一般水浴或金属浴后会消失，不会影响后续提取。如溶液未变清亮，说明细菌裂解不彻底，可能导致DNA提取量减少或不纯。如提取菌体超过1.5 mL，可适当延长温育时间。
●（ 可选）12,000 r/min离心1 min去除未裂解完全菌体，转移上清液至新的离心管中。
4，加入220 μL无水乙醇，振荡混匀，此时可能出现白色絮状沉淀，简短离心将内壁的液体离心到管底。
5，将所得的溶液和絮状沉淀全部加入DNA硅胶膜吸附柱上（吸附柱套入收集管中），12,000 r/min离心1 min，倒掉滤液，吸附柱套回收集管。
● 溶液中基因组DNA吸附在硅胶膜上，如发生堵塞，说明提取的菌体过量，应适当减少菌量或延长离心时间，直到所有的溶液顺利离心到收集管中为止。
6，加入500 μL去蛋白缓冲液，12,000 r/min离心1 min，倒掉滤液，吸附柱套回收集管。
☑ 去蛋白缓冲液初次使用前加入16 mL无水乙醇。
7，加入500 μL漂洗液，12,000 r/min离心1 min，倒掉滤液，吸附柱套回收集管。
☑ 漂洗液初次使用前加入 60 mL 无水乙醇。
8，再次加入500 μL漂洗液，12,000 r/min离心1 min，倒掉滤液，吸附柱套回收集管，再次12,000 r/min离心1 min，彻底去除吸附柱中残留的液体，室温放置2 min，去除残留的乙醇。
9，将吸附柱套入新的1.5 mL无菌的离心管中，向吸附柱中央处悬空滴加50~100 μL洗脱液，室温静置5 min，12,000 r/min离心2 min，离心得到的液体转移到无菌的EP管中，-20℃保存待用。
● 洗脱液可用无菌去离子水替代，但pH值应在8.0~8.5。
● 将洗脱液预热到60℃使用，可提高基因组DNA得率。
● 为提高基因组DNA提取得率，可将洗脱得到的溶液再次吸出滴加到吸附柱中央，静置几分钟后再次离心收集。
纯度及浓度检测分析：
1、提取得到的细菌基因组DNA片段可用紫外分光光度计测量浓度与纯度。
2、DNA在OD260处有明显的吸收峰，在此条件下，1 OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50 μg/mL；单链DNA或2.RNA为40 μg/mL；寡核苷酸为20 μg/mL。
3、OD260/280=1.7~1.9，如果A260/280≤1.7或比值过低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质污染，需要纯化样品。若DNA样品中A260/280≥2.0表明样品有RNA或DNA降解。
4、洗脱液使用去离子水时候，OD260/280会偏低，但不表示纯度低。
细菌基因组DNA纯化试剂盒(硅胶膜柱法)使用注意事项：
1、本试剂盒提取使用的器皿、移液器等均应为专用，离心管、枪头等一次性耗材需进行高压灭菌。操作人员应穿戴洁净工作服、口罩、帽子、使用一次性无粉手套。
2、使用新鲜培养的菌液，确保提取的基因组DNA不被降解。
3、加入悬浮液后应充分悬浮菌液，以免影响提取效果。
4、裂解液注意不要直接接触皮肤，如有接触请用大量清水冲洗。
5、去蛋白缓冲液和漂洗液使用后盖紧盖子，以免乙醇挥发影响抽提效果。
6、基因组DNA需长期保存，建议使用洗脱液洗脱，分装保存于-20℃或-80℃。
7、请严格按照本说明书操作步骤进行，不同批号的试剂若无特殊说明，请勿混合使用，并保证在有效期内使用该试剂盒，因操作不当导致的基因组DNA提取效果不佳，本公司概不负责。
8、妥善处理所有样本和试剂材料，彻底清洁和消毒操作台面。
