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HKM027系列 Circleligase Ⅱ（环状连接酶）
编号：HKM027系列
规格：10次 | 50次
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编号：C22164G1
规格：10mL×20支/盒
产品名称：Circleligase Ⅱ
中文名称：环状连接酶
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 （点击名称进入下单页面） | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
| HKM027系列 | Circleligase Ⅱ | 10次 | 50次 | 热稳定性环状连接酶 | — |
| HKM027-01A | Circleligase Ⅱ | 10次 | 960 | |
| HKM027-01B | 环状连接酶 | 50次 | 4288 |
产品描述：Circleligase II 是一种热稳定性酶，可以在没有互补序列存在的情 况下催化具有 5'-磷酸基团和 3'-羟基基团的单链 DNA（ssDNA）/单 链 RNA (ssRNA)的自环化，该反应不依赖于 ATP。
产品特点：
◐可在标准反应条件下，高效催化长度为 15-200nt 的 ssDNA / ssRNA 发生链内环化；
◑可催化单链底物与 5'磷酸化/腺苷酸化的单链 DNA 接头连接。
产品用途：
1) 产生环状的单链 DNA 分子，用于滚环复制或者滚环转录的实 验研究。
2) 用于 cfDNA/ctDNA 测序，甲基化测序等。
检测方法：
1）连接产物经 20% 聚丙烯酰胺/8 M 尿素的 PAGE 胶检测，线 性 DNA 分子的迁移速度较环状 DNA 分子快。
2）加入核酸外切酶 I ( Exo I )，37℃反应 45min，线性 DNA 被 完全消化，而环状单链 DNA 分子不受外切酶的影响。Exonuclease I， 能够从 ssDNA 的 3'-OH 末端分解生成 5'-单核苷酸，对 ss DNA 具 有较高的特异性，不分解双链 DNA 及 RNA。
检测结果：
图：Circleligase II 连接结果检测（变性 PAGE 胶）
lane1：未经 Circleligase II 和外切酶处理的 70nt 线性单链 DNA；
lane2：Circleligase II 处理后的 70nt 单链 DNA 环化产物；
lane3：70nt 线性单链 DNA 环化产物经 Exo I 酶切处理结果；
保存温度：-20 ℃保存，或- 80℃长期保存。
Circleligase Ⅱ 产品包装：
| 产品组成 | A 包装 | B 包装 |
| Circleligase Ⅱ (100U/μl) | 1000U | 5000U |
| 5×Circleligase Ⅱ Reaction Buffer | 100μl | 500μl |
| 50mM Mncl₂ | 20μl | 100μl |
| ssDNA Control oligo（5pmol/μl） | 5μl | 5μl |
| RNase free water | 500μl | 1ml×2 |
质量控制：所有组分经检测均无大肠杆菌 DNA 残留，无核酸 内/外切酶、磷酸酶以及 RNA 酶活性污染。
活性定义：60℃条件下，1 小时内催化 1pmol 的标准线性单 链寡核苷酸（70nt，5' 磷酸化）转换成抗核酸外切酶 I 消化的环状结构所需要的酶量定义为 1 个活性单位。
常用反应体系（20μl）：
| 产品组成 | 体积 |
| Circleligase Ⅱ (100U/μl) | 1μl |
| 5×Circleligase Ⅱ Reaction Buffer | 4μl |
| 50mM Mncl₂ | 1μl |
| ssDNA | 1-10pmol |
| RNase free water | To 20μl |
注: 1) ssDNA (15-200nt 环化效率较高)应含有 5'-磷酸基 团和 3'-羟基基团；
2)若实验有特殊需要，可缩短反应时间至 30min， 若为复杂模板，反应时间应适量延长或增加酶量。
反应条件：
1×反应缓冲液条件下，60℃温育 1h。
80℃，10 分钟热失活。
相关产品：
| HKM006 | Exonuclease I |
| HKM007 | Exonuclease III |
| HKM028 | CircleLigase I Plus |
