产品名称:NGS Fast Ligation Module
中文名称:NGS 快速连接模块
产品编号与包装规格:
编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
HKM066A | NGS Fast Ligation Module | 24次/盒 | 预混酶模块(NGS 快速连接) | 2745 |
产品描述:
NGS Fast Ligation module 是专门针对于 illumina 高通量测序平台所优化的预混酶模块。使用本模块可以将 3'端 带有 dA 尾的 DNA 片段与 adapter 进行快速连接。与常规方法比较,本模块采用了一步法反应流程,NGS DNA Fragmentation/End Repair/dA-Tailing Module 或 NGS DNA End Repair/dA-Tailing Module 反应后所获得的片段后 DNA,无需磁珠纯化,可使用本模块直接与 adapter 进行连接,省去了多步磁珠纯化步骤,操作更加简便,文库转 化效率更高。
适用范围:将 DNA adapter 与 3'端添加 dA 的 DNA 文库片段的快速连接(如 NGS DNA Fragmentation Module 和 EndRepair/dA-tailing Module 处理后的产物)。
适用样本量:1ng -1µg DNA。
产品特点:
1) 无需磁珠纯化,可直接将 DNA adapter 与带有 dA-Tailing 的 DNA 片段连接;
2) 连接效率高,可进行微量样本的 DNA adapter 连接。
注意事项:
1、开始实验前,对 DNA 浓度精确定量至关重要,推荐 DNA 上样量为 1ng-1µg。DNA可溶解于去离子水、10 mM Tris Buffer EB 或 0.1×TE 等。
2、推荐 DNA 的上样量指的是片段化后的 dsDNA 的量。推荐 使用 Qubit、Picogreen 或者其他染料法对 DNA 浓度进行精确定 量。
3、请确认 DNA 溶液中不含阳离子及螯合剂,如果 DNA 溶解 于 1×TE 或不确定 DNA 溶液中的 EDTA 浓度,需先对 DNA 进行纯化后再进行片段化反应。
保存条件:-20℃保存,尽量避免反复冻融。
NGS Fast Ligation Module 产品组成:
| A 包装(24 次) | B 包装(96 次) |
Adapter-ligation Enzyme | 120μl | 480μl |
Adapter-ligation Buffer | 1ml×2 | 1ml×5 |
RNase Free Water | 1ml | 1ml×2 |
操作步骤:
1,根据经 NGS DNA Fragmentation Module 和 End Repair/dA-Tailing Module 处理后的产物的量,计算使用接头 的量并按照下表对接头浓度进行稀释:
起始样本量 Adapter | 稀释倍数 | 稀释后 Adapter |
100ng<X≤1μg | 不稀释 | 10μM |
25ng<X≤100ng | 稀释 2 倍 | 5μM |
5ng<X≤25ng | 稀释 10 倍 | 1μM |
1ng<X≤5ng | 稀释 25 倍 | 0.4μM |
2,按照下表所示各组分用量配制反应体系,并将配制完成的反应体系轻柔混匀后置于冰上
名称 | 体积 |
dA-tailed DNA | 40μl |
Adapter -Ligation Buffer | 50μl* |
Adapter -Ligation Enzyme | 5μl |
DNA Adapter | 5μl** |
Total volume | 100μl |
注:* Adapter -Ligation Buffer 长时间放置会有白色沉淀,用前请上下颠倒、振荡,使液体中白色沉淀充分溶 解并瞬时离心后使用。
**本公司接头浓度为 10μM,请根据片段化 dsDNA 量对接头进行稀释,加水补齐,使接头体积为 5μl。
3,将此配制好的 100µl连接反应液轻柔吸打混匀,置于 PCR 仪中,反应程序如下:
温度 | 时间 |
热盖 105℃ | off |
16℃ | 15min |
4℃ | Hold |
注:当片段化 dsDNA 量较低,实验效果不理想时,可尝试将连接时间延长一倍。
4,连接产物磁珠纯化(Post Ligation Clean Up) 该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连 接的 Adapter 或 Adapter Dimer 等无效产物。