产品名称：NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit
中文名称：NGS第二链cDNA合成试剂盒
产品编号与包装规格：
产品描述：NGS Second-Strand cDNA Synthesis kit 是一种在合成了 cDNA 第一链的基础上去除 RNA-DNA 杂合链中的 RNA 链，并合成 cDNA 第二链，最终形成双链 cDNA 的试剂盒。主要用于二代测 序（NGS）文库构建中 cDNA 第二链的合成。
产品特点：
1) 本试剂盒包含了进行 cDNA 第二链合成所需的各种试剂， 简便，高效；
2) 合成的双链 cDNA，可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、 cDNA 文库的构建等。
应用实例：
1、cDNA 第二链合成
模板：采用体外转录 RNA 为模板逆转录得到 810bp cDNA
M：DL2000；
泳道 1：逆转录得到 cDNA 第一链；
泳道 2：protein cDNA 第二链合成试剂盒得到 cDNA 第二链；
泳道 3：A 公司 cDNA 第二链合成试剂盒得到 cDNA 第二链；
2、cDNA 第二链合成产物酶切验证
DNase I 能消化 DNA-RNA 杂合链中的 DNA 和 dsDNA，而 RNase H 消化 DNA-RNA 杂合链中的 RNA，不消化 dsRNA。
M：DL2000；
泳道 1：cDNA 第一链；
泳道 2：cDNA 第一链+DNase I；
泳道 3：cDNA 第一链+RNaseH；
泳道 4：cDNA 第二链；
泳道 5：cDNA 第二链+DNase I；
泳道 6：cDNA 第二链+ RNaseH；
NGS Second-Strand cDNA Synthesis Kit 产品包装：
| 产品组成 | A包装 | B包装 |
NGS Second-Strand
DNA Synthesis Enzyme Mix | 100μl | 500μl |
NGS Second-Strand
cDNA Synthesis Reaction Buffer | 500μl | 1ml×3 |
| RNase Free Water | 1ml×2 | 1ml×6 |
操作方法：
1，在冰上向已完成的 cDNA 第一链 20μl 反应体 系中依次加入如下试剂：
| 产品组成 | 体积 |
| First-Strand Synthesis product | 20ul |
| Second-Strand cDNA Synthesis Enzyme Mix | 5μl |
| Second-Strand cDNA Synthesis Reaction Buffer | 20μl |
| RNase free water | 55ul |
2，按上述体系轻轻混匀，随后离心沉淀液体。
3，16℃孵育 2 小时，热盖温度不超过 40℃。
4，75℃ 热 失 活 20min ； 或 加 入 5μl 0.5M EDTA(pH8.0)终止反应。
5，后续使用磁珠纯化、酚氯仿抽提、乙醇沉淀 等方法纯化合成的双链 cDNA，也可以使用 适应的 DNA 纯化试剂盒进行纯化。