细菌新型生化鉴定管使用说明
――071821 单核增生李斯特氏菌生化鉴定盒(13种×10次)(SN标准)
一)单核增生李斯特氏菌生化鉴定盒(SN标准) 整套试剂及用品
定生化反应的13种试剂(表1)、0.85%无菌生理盐水10瓶、0.5 McFarland的浊度管1瓶、一次性吸管10支。
二)生化管的使用方法
开启西林瓶前,用75%酒精棉消毒西林瓶表面,在无菌条件下,按铝盖上的箭头方向打开铝盖,撕开铝盖,打开西林瓶胶塞(如图1)。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
三)单核增生李斯特氏菌生化鉴定盒的详细使用方法
挑取选择性培养基上的可疑菌落接种TSA-YE琼脂平板上于35℃纯培养24h后进行菌落颜色、镜检等项目使用。
蓝色菌落检验:用45°光斜射TSA-YE琼脂平板,菌落呈蓝灰色到蓝色。用标准菌株作为阳性对照。将纯培养后的菌落接种于TSB-YE肉汤,35℃培养24h,供生化等项目检验使用。
典型运动镜检:挑取在TSA-YE琼脂平板上生长良好的菌落于洁净载玻片上,李斯特氏菌为革兰氏阳性小杆菌,大小为0.4~0.5µm×0.5~2.0µm;用生理盐水制成菌悬液,在油镜或相差显微镜下观察,该菌出现轻微旋转或翻滚样的运动。
过氧化氢酶试验:挑取TSA-YE平板上的菌落于洁净载玻片上,滴加1滴3%的过氧化氢(H2O2)溶液,李斯特氏菌呈过氧化氢酶阳性反应。
溶血试验:从每个TSA-YE琼脂平板上至少挑取2个菌落刺种血平板,35℃培养24h~48h。
生化鉴定:将TSB-YE肉汤培养物接种于每种微量西林瓶内。将已接种的西林瓶再套上胶塞,一般采用全加塞(如图2左两瓶所示),特殊情况在下表注明采用半加塞(如图2右两瓶所示),直立于内托的凹槽内(如图2),或放置于合适的瓶架中,于35-37℃培养箱中培养,结果观察见表1。
注意:如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式,请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
表1 | |||||
产品名称 | 结果判定 | 培养时间 | 使用说明 | ||
阳性 | 阴性 | ||||
硝酸盐(还原) | 深红色 | 略带淡粉红色 | 5d | 西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)培养后加硝酸盐还原试剂甲、乙液各2滴,混匀,立即观察结果。 | |
3%过氧化氢溶液 | 剧烈起泡 | 无气泡 | -- | 直接滴加在玻片的新鲜菌苔涂片上。 | |
葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、木糖、鼠李糖 | 黄色 | 紫色 | 24h—5d | ||
葡萄糖磷酸盐胨水(MR) | 红色 | 不变色 | 48h | 西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)培养后加MR试剂2-3滴,立即观察结果。 | |
葡萄糖磷酸盐胨水(VP) | 红色 | 不变色 | 48h | 西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)培养后依次加入8滴VP试剂甲液及4滴乙液,混匀,再培养10-20分钟观察结果。 | |
尿素 | 桃红色 | 淡橙红色 | 24h—5d | 打开西林瓶胶塞后,向西林瓶中加入所配备的1.5mL/瓶的无菌水,充分溶解。再用接种针挑取新鲜菌苔直接接种于西林瓶内。接种后,置于35-37℃培养箱中培养,逐日观察结果。 | |
七叶苷 | 棕黑色 | 不变色 | 24h—5d | ||
SIM培养基 | 扩散生长,成伞状 | 无扩散生长 | 25℃,2—5d | 用接种针挑取新鲜菌苔穿刺,竖立培育。 | |
三糖铁琼脂 | 产气 | 有气泡 | 无气泡 | 24h-5d | 用接种针挑取新鲜菌苔穿刺,穿刺完毕后在斜面上划“之”字形接种,竖立培育。西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)后竖立培育。 |
分解蔗糖或乳糖 | 斜面和底层变黄色 | 不变色 | |||
分解葡萄糖 | 底层变黄,斜面不变色或者红色加深 | 不变色 | |||
产H2S | 变黑色 | 不变色 | |||
备注:本鉴定盒是按照澳门·威斯尼斯网站产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。 |
四)单核细胞增生李斯特氏菌的主要生化特性及有关菌的区别见表2。(只供参考)