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HKV212-01A Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell（感受态细胞）
编号：HKV212-01A
规格：100μl×10支
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编号：CP0660
规格：225mL×10袋/盒
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编号：C27381D1
规格：500mL/袋×5
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编号：CP0730
规格：225mL/袋，10袋/盒
产品名称：Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell
中文名称：Rosetta(DE3)plysS 感受态细胞
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
| HKV212-01A | Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell | 100μl×10支 | 感受态细胞 | 386 |
产品描述：Rosetta 菌株是携带氯霉素抗性质粒 BL21 的衍生菌，补充大肠杆菌缺乏的 6 种稀有密码子（AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA）对应的 tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。本产品是经特殊工艺制作得到的感受态细胞，可用于DNA 的化学转化。
产品特点：
适用于T7 RNA 聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主，T7 噬菌体 RNA 聚合酶基因的表达受控于 λ 噬菌体 DE3 区 的 lacUV5 启动子，该区整合于 BL21 的染色体上。
适用于非毒性蛋白的表达。
基因型：
转化效率：使用 pUC19 质粒检测，转化效率可达 10⁷ cfu/μg。
保存温度：-70℃
Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell 产品包装（A包装）：
| 产品组成 | 体积 |
| Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell | 100μl×10 |
| Control DNA pUC19（1ng/μl） | 10μl |
操作方法：
1）取感受态细胞置于冰浴中，一次转化感受态细胞的用量为 50-100μl，可根据实际情况分装使用。所用 DNA 的体积不要超过感受态细胞的十分之一，以下实验以 100μl 感受态细胞为例。
2）待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（通常 100μl 感受态细胞能够被1ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用移液枪吹打混合，冰上放置 30 分钟。
3）将离心管置于 42℃水浴中，热击 60-90 秒，迅速将离心管置于冰上，放置 2-3 分钟。
4）向每个离心管中加入 500μl 无菌不含抗生素的 LB 或 SOC 培养基中，37℃摇床，150rpm 振荡培养 45 分钟，使质粒上相关抗性基因表达，菌体复苏。
5）吸取 200μl 已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的 LB 或 SOC 固体平板上，用无菌涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃培养箱里直至液体完全吸收，倒置培养 12-16 小时。涂布量应根据具体实验调整，如果转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板，如果预计的克隆数较少，可 3000rpm 离心 5 分钟，吸取部分培养基，悬浮菌体后涂布在一个平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰箱中保存，如果第二日转化菌落数过少，可以将剩余菌液再涂布在新的平板上。
注意事项：
1）感受态细胞应保存于-70℃冰箱中，不可反复冻融，或放置时间过长，避免感受态转化效率降低。
2）实验操作时，应注意无菌条件。
3）实验过程中，可保留部分连接反应液，当转化不成功时，可重新转化。
