产品名称:Easy Cloning T-vector (pEC-T)
产品编号与包装规格:
编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
HKT003-01A | Easy Cloning T-vector (pEC-T) | 20次 | T载体 | 540 |
产品描述:
Easy Cloning T-vector是一种PCR 产物高效TA克隆的专用 T载体。它由pBluescript II KS 载体改造而成:保留了pBluescript II KS 载体全部的酶切位点;PCR 产物插入位点处于多克隆酶 切位点的中间,其两侧都有众多的酶切位点可供选择。
由于本载体以 pBluescript II KS 载体为基础构建而成,所以 它具有同pBluescript II KS 载体相同的功能:PCR 产物插入后可 以利用α-互补性进行蓝白斑筛选,挑选阳性克隆。可以用 M13 通用引物和T7,T3 启动子引物对PCR 产物进行测序。含有 T7 及T3RNA 聚合酶的启动子,可以对插入片段进行体外转录。
Easy Cloning T-vector (pEC-T) 产品包装(A包装):
操作方法:
1) 选择合适的连接体系(详细介绍见背面)。
2) 取10 μL 加入至 100 μL 感受态细胞中,用移 液枪吹打混合,冰上放置30 分钟。
3) 将离心管置于 42℃水浴中,热激 60-90 秒,迅 速将离心管置于冰上,放置 2-3 分钟。
4) 向每个离心管中加入 500μL 无菌不含抗生素的 LB 或SOC 培养基中,37℃摇床,150rpm 振荡培养 45 分钟,使质粒上氨苄抗性基因表达,菌体复苏。
5) 吸取200μL 已转化的感受态细胞,加到含氨苄 青霉素的 LB 或SOC 固体平板上,用无菌涂布棒将细 胞均匀涂开,将平板置于 37℃培养箱里直至液体完全 吸收,倒置培养 12-16 小时。
6) PCR检测,利用试剂盒自带的高速PCR扩增试 剂2×FastTaq Mast Mix直接进行菌落PCR鉴定。