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HKT001系列 Simple Cloning T-vector(pSC-T)
编号：HKT001系列
规格：20次 | 20次×5
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CP2116P1 pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液 300mL×15瓶
编号：CP2116P1
规格：300mL×15瓶/箱
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028074A 胰酪大豆胨琼脂(TSA)平板(药典) 90mm×20个
编号：028074A
规格：90mm×20个/盒
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C28025D4 0.1%蛋白胨水 100mL×10袋
编号：C28025D4
规格：100mL×10袋
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C28025D2 0.1%蛋白胨水 225mL×10袋
编号：C28025D2
规格：225mL×10袋
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SCDLP液体培养基
编号：C27010P1
规格：225mL×6瓶
产品名称：Simple Cloning T-vector(pSC-T)
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
| HKT001-01A | Simple Cloning T-vector(pSC-T) | 20次 | T载体 | 540 |
| HKT001-01B | 20次×5 | 2398 |
产品描述：
Simple Cloning T-vector（pSC-T）是一种 PCR 产物高效 TA 克隆的专用 T 载体，本载体消除了 PCR 产物插入区域两侧的 多克隆位点。
在 PCR 克隆构建过程中，为了进一步的克隆步骤，常会 在PCR 产物的两端引入专门的酶切位点，如 T 载体上已带有 相同的酶切位点，会对下一步的酶切连接带来不利的影响。为 消 除 多 克 隆 酶 切 位 点 带 来 的 负 作 用 ， Simple Cloning T- Vector去除了PCR 产物插入区域两侧所有的酶切位点。带有酶 切位点的 PCR 产物克隆后进行酶切时，T 载体上不会有相同 的酶切位点影响酶切反应，可以大大提高酶切效率，增加亚 克隆成功率。多克隆位点的消除并不影响 β-半乳糖苷酶的正 常表达，PCR 产物克隆后仍可以利用 α-互补性进行蓝白斑筛 选，挑选阳性克隆。
由于本载体上消除了多克隆酶切位点，在 PCR 扩增引物设 计时需要考虑导入合适的酶切位点。
产品特点：提供 2×快速连接系统（15 分钟即可完成连接反应）及 10×传统 型连接系统（过夜连接可获得最佳连接效果），具体使用说明见 后。
使用建议：
1）连接使用的 PCR 片段3' 端应带有 A 末端，如果是使用 pfu 等高保真聚合酶扩增的不带 A 末端的平末端片段，不可直 接用于进行连接反应。
2）克隆时使用的 Insert DNA 片段（PCR 产物）建议进行 切胶回收纯化，否则 PCR 产物中的短片段 DNA、残留引物等 杂质都会影响 TA 克隆效率。
3）转化过程中建议使用 Control Insert DNA 做对照，以便 在实验出现问题时确定原因。
保存温度：-20℃
Simple Cloning T-vector(pSC-T) 产品包装（A包装）：
质量保证：
Control Insert 克隆后的白色菌落中，有90%以上含 有Insert DNA 片段。
克隆后，经测序确认''T''突出的存在。
操作方法：
1） 选择合适的连接体系（详细介绍见背面）。
2） 取10μL 加入至 100μL 感受态细胞中，用移液 枪吹打混合，冰上放置30 分钟。
3） 将离心管置于 42℃水浴中，热击 60-90 秒，迅 速将离心管置于冰上，放置 2-3 分钟。
4） 向每个离心管中加入 500μL 无菌不含抗生素的 LB 或SOC 培养基中，37℃摇床，150rpm 振荡培养 45 分钟，使质粒上氨苄抗性基因表达，菌体复苏。
5） 吸取200μL 已转化的感受态细胞，加到含氨苄 青霉素的 LB 或SOC 固体平板上，用无菌涂布棒将细 胞均匀涂开，将平板置于 37℃培养箱里直至液体完全 吸收，倒置培养 12-16 小时。
6） PCR检测，利用试剂盒自带的高速PCR扩增试 剂2×FastTaq Mast Mix直接进行菌落PCR鉴定。
A、常规连接反应体系（20μL）
| 组分 | 体积 |
| 10×Ligation Buffer | 2μL |
| pSC-Tvector（25 ng/μL） | 2μL |
| 目的PCR 片段/ Control Insert DNA | X μL/1 μL |
| T4 DNA Ligase | 1μL |
| ddH2O | 至 20μL |
反应条件：
1）16℃保温 3 小时以上或过夜。
2）在4℃保温过夜，或室温数小时，但反应效率较16℃过夜略低。 实践表明连接反应的温度越低，达到理想连接效率所需时间越长，温度 较高则所需时间较短。
注：10×Ligation Buffer融化时，如果出现少量沉淀属正常现象，请于37℃ 溶解混匀后使用。
B、 快速连接反应体系：
| 组分 | 体积 |
| 2×Quick Ligation Buffer | 10μL |
| pSC-Tvector（25 ng/μL） | 2μL |
| 目的PCR 片段/ Control Insert DNA | X μL/1 μL |
| T4 DNA Ligase | 1μL |
| ddH2O | 至 20μL |
反应条件：
1）16℃ 或 25℃下，保温15至30分钟。
2）保温5分钟也能正常进行反应，但反应效率略为 降低。25℃下进行连接，其效果略差于16℃下连接效果。 而更高的温度（>26℃）则较难形成环状DNA。连接效率 偏低时，可适当延长连接反应时间，但过长的连接时间 （如数小时）连接效果反而会变差。一些较难连接的片 段（如大片段），请采用传统型10× T4 DNA Ligation Buffer体系进行尝试。
