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HKE377 NLS-Cas9(H840A) Nickase（内切酶）
编号：HKE377
规格：50μg/盒
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产品名称：NLS-Cas9(H840A) Nickase
中文名称：NLS-Cas9(H840A) 内切酶
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
| HKE377 | NLS-Cas9(H840A) Nickase | 50μg/盒 | crispr基因编辑（内切酶） | 1575 |
产品描述：
CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统，改造后的 II 型 CRISPR/Cas9 系统在基因的定点修饰中展现出巨大的应用潜能。脱靶效应是目前 CRISPR/Cas9 技术应用的一个难题，在基因编辑应用中，可能会出现难以预测的后果。
本制品是 spCas9 Nuclease 的一个突变体。Cas9 Nuclease 具有两个切割活性中心，从而实现在 sgRNA 靶序列特定位点引入 DNA 双链断裂（DSB）。NLS-Cas9（H840A）Nickase 在Cas9Nuclease 基础上突变其中一个切割活性中心，其能在 sgRNA 靶序列所在的DNA 链上产生切口，从而形成功能性的单链断裂，并且通过在蛋白两端加了核定位信号（NLS），可使蛋白进入细胞核内进行基因组 编辑，配合一对 gRNA 使用，可实现 Cas9 Nuclease 相同的基因编辑效果，由于有效的识别序列由 20 bp 增加至 40 bp，可明显减少意外的脱靶基因修饰，从而显著提高CRISPR/Cas9 技术基因修饰的特异性。
产品特点：纯蛋白体系，避免 CRISPR 基因敲除时引入质粒或病毒干扰； 可显著降低脱靶效应。
产品用途：
1，基于蛋白与 sgRNA 转染的非病毒载体 CRISPR 基因敲除；
2，基于蛋白与 sgRNA 转染的非病毒载体 CRISPR 基因敲入；
3，sgRNA 剪切靶点 DNA 效率检测，降低体内筛选成本；
4，体外剪切靶 DNA 的特异位点。
应用实例：图例）Cas9(H840A) Nickase DNA 切割活性检测：
带有靶位点的超螺旋 DNA（cccDNA）；
酶切产生切刻后的开环 DNA（ocDNA）；
50-100ng 酶可有效切割 cccDNA（>95%）。
保存体系：10mM Tris-HCl，300mM NaCl，0.1mM EDTA，50% Glycerol， PH7.4，25℃。
保存温度：-20℃保存，或-80℃长期保存。
Cas9(H840A) Nickase 产品包装（A包装）：
| 产品组成 | 体积 |
| NLS-Cas9(H840A) Nickase(0.1μg/μl) | 500 μL |
| 10×Reaction Buffer | 1 ml |
质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE 胶检测仅可见清晰单一的目的条带，纯度达 95%；内毒素含量< 0.1EU/μg；qPCR 方法检测无大肠杆菌基因组残留；无 RNase、核酸内、外切酶污染。
体外切割体系（20μL）：
| Supercoiled DNA | 200 ng |
| sgRNA | 200 ng |
| NLS-Cas9 H840A Nickase | 50-100 ng |
| 10×Reaction Buffer | 2 μl |
| RNase Free Water | To 20 μl |
37 ℃保温 1 h、70℃保温 10 min
注：在反应体系中可添加 RNase Inhibitor 至 1U/μl，防止RNase 污染。
相关产品：
| HKE365 | NLS-Cas9 Nuclease |
| HKE366* | Cas9（D10A）Nickase |
| HKE368** | Cas9（D10A, H840A）Nuclease |
| HKE369 | sgRNA In Vitro one-step Transcription Kit |
| HKE370 | sgRNA Screening and Genotype Confirmation Kit |
* 为 Cas9(D10A) Nickase，能在与 sgRNA 靶序列互补的 DNA 链上产生切口，从而形成功能性的单链断裂，可以减少意外的脱靶基因修饰。
** 为 Cas9(D10A, H840A) Nuclease，具有靶 DNA 结合活性，但无切割活性，可用于阴性对照等用途。
