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HKV211-01A BL21(DE3) Competent Cell（感受态细胞）
编号：HKV211-01A
规格：100μl×10支
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编号：00501000
规格：1000ml
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编号：060090
规格：10份/盒（9袋/份）
产品名称：BL21(DE3) Competent Cell
中文名称：BL21(DE3)感受态细胞
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
| HKV211-01A | BL21(DE3) Competent Cell | 100μl×10支 | 感受态细胞 | 386 |
产品描述：本产品是经特殊工艺制作得到的感受态细胞，可用于 DNA 的化学转化。BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白，该菌株是以 T7 RNA 聚合酶为表达系统的外源基因蛋白高效表达的宿主。T7 噬菌体 RNA 聚合酶基因的表达受 λ 噬菌体 DE3 区的 lacUV5 启动子调控，该区整合在 BL21 染色体上。
产品特点：
适用于携带稀有密码子蛋白的表达。
适用于非毒性蛋白的表达。
基因型：
转化效率：使用 pUC19 质粒检测，转化效率高达 10⁷cfu/μg。
保存温度：-70℃
BL21(DE3) Competent Cell 产品包装（A包装）：
| 产品组成 | 体积 |
| BL21(DE3) Competent Cell | 100μl×10 |
| Control DNA pUC19（1ng/μl） | 10μl |
操作方法：
1）取感受态细胞置于冰浴中，一次转化感受态细胞的用量为 50-100μl，可根据实际情况分装使用。所用 DNA 的体积不要超过感受态细胞的十分之一，以下实验以 100μl 感受态细胞为例。
2）待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（通常 100μl 感受态细胞能够被1ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用移液枪吹打混合，冰上放置 30 分钟。
3）将离心管置于 42℃水浴中，热击 60-90 秒，迅速将离心管置于冰上，放置 2-3 分钟。
4）向每个离心管中加入 500μl 无菌不含抗生素的 LB 或 SOC 培养基中，37℃摇床，150rpm 振荡培养 45 分钟，使质粒上相关抗性基因表达，菌体复苏。
5）吸取 200μl 已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的 LB 或 SOC 固体平板上，用无菌涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃培养箱里直至液体完全吸收，倒置培养 12-16 小时。涂布量应根据具体实验调整，如果转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板，如果预计的克隆数较少，可 3000rpm 离心 5 分钟，吸取部分培养基，悬浮菌体后涂布在一个平板上。涂布剩余的菌液在置于 4℃冰箱中保存，如果第二日转化菌落数过少，可以将剩余菌液再涂布在新的平板上。
注意事项：
1）感受态细胞应保存于-70℃冰箱中，不可反复冻融，或放置时间过长，避免感受态转化效率降低。
2）实验操作时，应注意无菌条件。
3）实验过程中，可保留部分连接反应液，当转化不成功时，可重新转化。
