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HKT005系列 2×pED-T vector Fast Ligation Mix
编号：HKT005系列
规格：20次 | 20次×5
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一次性无菌接触皿 5.5cm (凸面 20×48袋 960个/箱)
编号：202211910
规格：5.5cm ，凸面 20×48袋 960个/箱
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022143 麦康凯琼脂培养基(2020CP、EP、USP) 250g/瓶
编号：022143
规格：250g/瓶
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DMEM,无糖，含L-谷氨酰胺
编号：XB01-10
规格：500mL/瓶
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3.5L厌氧微生物培养袋 厌氧产气袋
编号：C-35
规格：10袋/包
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蜡样芽胞杆菌定量质控菌株 QS006A
编号：QS006A
规格：110-1100 CFU/瓶
产品名称：2×pED-T vector Fast Ligation Mix
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
| HKT005-01A | 2×pED-T vector Fast Ligation Mix | 20次 | T载体 | 540 |
| HKT005-01B | 20次×5 | 2398 |
产品描述：
Easy Digestion T-vector 是一种PCR产物高效TA克隆的 专用T载体，它由pTZ19R载体改造而成。Easy Digestion T-vector在插入位点两端特别设计了两个BamH I 位点，使插 入片段可以用BamH I单酶切检测及亚克隆，另外还可以使用 非常廉价和高效的EcoR I与Hind III双酶切检测及亚克隆。
传统 T 载体在进行连接时的操作程序是：载体、片段、T4 DNA Ligase Buffer、T4 DNA Ligase。本制品是在传统模式上 将除了插入片段的各成分进行预混，并使其在稳定性、转化子 数目、阳性率方面不低于传统模式，使用时只需加入插入片段即 可，大大简化了操作过程，降低了配制连接体系过程中的误差 和污染率，节省了时间。
产品特点：
高效：快速连接，15 分钟即可完成连接反应。
稳定：-20℃取出反复冻融 20 次，克隆数目及阳性率不 受影响。
快捷：只需加入插入片段再补充去热源水到10μL体系。
便利：附赠 2×Taq Master Mix ，2×Fast Taq Master Mix ( 快速 PCR 系统 ) ，及 DNA Ladder 2000 Plus，满足您的 PCR 鉴定、电泳实验需求。
使用建议：
1）连接使用的 PCR 片段 3'端应带有 A 末端，如果是使用 Pfu 等高保真聚合酶扩增的不带 A 末端的平末端片段，不可 直接用于进行连接反应。
2）克隆时使用的 Insert DNA 片段（PCR 产物）建议进行切 胶回收纯化，否则 PCR 产物中的短片段 DNA、残留引物等 杂质都会影响 TA 克隆效率。
3）转化过程中建议使用 Control Insert DNA 做对照，以便在 实验出现问题时确定原因。
保存温度：-20℃
2×pED-T vector Fast Ligation Mix 产品包装（A包装）：
质量保证：
Control Insert 克隆后的白色菌落中，有 90% 以上含 有Insert DNA 片段。
Control Insert 经克隆后，经测序确认''T''突出的存在。
操作方法：
1） 快速连接反应体系：
| 组分 | 体积 |
| 2×pED-T vector Fast Ligation Mix (10 ng/μL ) | 10μL |
| 目的PCR 片段/ Control Insert DNA | X μL/1μL |
| ddH2O | 至 20μL |
反应条件：16℃或 25℃下，保温15至30分钟。
注：保温5分钟也能正常进行连接反应，但反应效率略 为降低。25℃下进行连接，其效果略差于16℃下连接效 果。而更高的温度（>26℃）则较难形 成环状DNA。
2) 取10μL 加入至100μL 感受态细胞中，用移液枪 吹打混合，冰上放置30分钟。
3) 将离心管置于42℃水浴中，热击60-90秒，迅速 将离心管置于冰上，放置2-3分钟。
4) 向每个离心管中加入500μL 无菌不含抗生素的 LB 或 SOC培养基中，37℃摇床，150rpm振荡培 养45分钟，使质粒上氨苄抗性基因表达，菌体复 苏。
5）吸取 200μL 已转化的感受态细胞，加到含氨苄青霉素 的 LB 或SOC 固体平板上，用无菌涂布棒将细胞均匀涂 开，将平板置于 37℃培养箱里直至液体完全吸收，倒置 培养 12-16 小时。
6） PCR 检测，利用试剂盒自带的高速 PCR 扩 增试 剂 2×FastTaq Mast Mix 直接进行菌落PCR 鉴定。
