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2×pSC-T vector Fast Ligation Mix（规格：20次 | 货号：HKT004-01A）
编号：HKT004-01A
规格：20次
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编号：60072120
规格：HK-100NT
产品名称：2×pSC-T vector Fast Ligation Mix
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
| HKT004-01A | 2×pSC-T vector Fast Ligation Mix | 20次 | T载体 | 540 |
产品描述：
Simple Cloning T-vector 是一种 PCR 产物高效 TA 克隆 的专用 T 载体，它由 pUC18 载体改造而成，去除了 PCR 产 物插入区域两侧所有的酶切位点。PCR 产物克隆后如果使 用其两端的酶切位点进行酶切时，T载体上不会有相同的酶 切位点影响酶切反应，可以大大提高酶切效率，增加亚克隆 成 功率。多克隆位点的消除并不影响 β-半乳糖苷酶的正常表 达，PCR 产物克隆后仍可以利用 α-互补性进行蓝白斑筛选， 挑选阳性克隆。
传统T 载体在进行连接时的操作程序是：载体、片段、 T4 DNA Ligase Buffer、T4 DNA Ligase。本制品是在传统模 式上将除了插入片段的各成分进行预混，并使其在稳定性、 转化子数目、阳性率方面不低于传统模式，使用时只需加入插入片段即可，大大简化了操作过程，降低了配制连接体系 过程中的误差和污染率，节省了时间。
2×pSC-T vector Fast Ligation Mix 产品包装（A包装）：
操作方法：
1） 快速连接反应体系：
| 组分 | 体积 |
| 2×pSC-T vector Fast Ligation Mix (10 ng/μL) | 10μL |
| 目的PCR 片段/ Control Insert DNA | X μL/1μL |
| ddH2O | 至 20μL |
反应条件：16℃或 25℃下，保温15至30分钟。
注：保温5分钟也能正常进行连接反应，但反应效率略 为降低。25℃下进行连接，其效果略差于16℃下连接效果。 而更高的温度（>26℃）则较难形成环状DNA。
2）取10μL加入至100μL感受态细胞中，用移液枪吹打 混合，冰上放置30分钟。
3）将离心管置于42℃水浴中，热击60-90秒，迅速将离 心管置于冰上，放置2-3分钟。
4）向每个离心管中加入500μL无菌不含抗生素的LB 或SOC培养基中，37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟，使 质粒上氨苄抗性基因表达，菌体复苏。
5）吸取 200μL 已转化的感受态细胞，加到含氨苄青霉素的 LB 或 SOC 固体平板上，用无菌涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃培 养箱里直至液体完全吸收，倒置培养 12-16 小时。
6） PCR 检测，利用试剂盒自带的高速PCR 扩增试剂 2×FastTaq Mast Mix 直接进行菌落PCR 鉴定。
