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HKT004系列 2×pSC-T vector Fast Ligation Mix
编号：HKT004系列
规格：20次 | 20次×5
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空气微生物气溶胶采样器（ACS-150）
编号：11001010
规格：ACS-150
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028033P1 硫乙醇酸盐流体培养基(FT)颗粒 250g/瓶
编号：028033P1
规格：250g/瓶
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一次性定量接种环 10ul 10支/包
编号：20230100
规格：10ul×10支/包；100包/盒
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029260 1%无菌TTC溶液(配套试剂) 1mL×10支
编号：029260
规格：1mL×10支/盒
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CRM011A 志贺氏菌显色培养基平板 90mm×20个
编号：CRM011A
规格：90mm×20个/盒
产品名称：2×pSC-T vector Fast Ligation Mix
产品编号与包装规格：
| 编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
| HKT004-01A | 2×pSC-T vector Fast Ligation Mix | 20次 | T载体 | 540 |
| HKT004-01B | 20次×5 | 2398 |
产品描述：
Simple Cloning T-vector 是一种 PCR 产物高效 TA 克隆 的专用 T 载体，它由 pUC18 载体改造而成，去除了 PCR 产 物插入区域两侧所有的酶切位点。PCR 产物克隆后如果使 用其两端的酶切位点进行酶切时，T载体上不会有相同的酶 切位点影响酶切反应，可以大大提高酶切效率，增加亚克隆 成 功率。多克隆位点的消除并不影响 β-半乳糖苷酶的正常表 达，PCR 产物克隆后仍可以利用 α-互补性进行蓝白斑筛选， 挑选阳性克隆。
传统T 载体在进行连接时的操作程序是：载体、片段、 T4 DNA Ligase Buffer、T4 DNA Ligase。本制品是在传统模 式上将除了插入片段的各成分进行预混，并使其在稳定性、 转化子数目、阳性率方面不低于传统模式，使用时只需加入插入片段即可，大大简化了操作过程，降低了配制连接体系 过程中的误差和污染率，节省了时间。
产品特点：
高效：快速连接，15 分钟即可完成连接反应。
稳定：-20℃取出反复冻融 20 次，克隆数目及阳性率 不受影响。
快捷：只需加入插入片段在补充去热源水到 10μL 体系
使用建议：
1）连接使用的 PCR 片段3' 端应带有 A 末端，如果是使用 pfu 等高保真聚合酶扩增的不带 A 末端的平末端片段， 不 可直接用于进行连接反应。
2）克隆时使用的 Insert DNA 片段（PCR 产物）建议进行 切胶回收纯化，否则 PCR 产物中的短片段 DNA、残留引 物等杂质都会影响 TA 克隆效率。
3）转化过程中建议使用 Control Insert DNA 做对照，以便 在实验出现问题时确定原因。
保存温度：-20℃
2×pSC-T vector Fast Ligation Mix 产品包装（A包装）：
质量保证：
Control Insert 克隆后的白色菌落中，有 90%以上 含有 Insert DNA 片段。
Control Insert 经克隆后，经测序确认''T''突出的存在。
操作方法：
1） 快速连接反应体系：
| 组分 | 体积 |
| 2×pSC-T vector Fast Ligation Mix (10 ng/μL) | 10μL |
| 目的PCR 片段/ Control Insert DNA | X μL/1μL |
| ddH2O | 至 20μL |
反应条件：16℃或 25℃下，保温15至30分钟。
注：保温5分钟也能正常进行连接反应，但反应效率略 为降低。25℃下进行连接，其效果略差于16℃下连接效果。 而更高的温度（>26℃）则较难形成环状DNA。
2）取10μL加入至100μL感受态细胞中，用移液枪吹打 混合，冰上放置30分钟。
3）将离心管置于42℃水浴中，热击60-90秒，迅速将离 心管置于冰上，放置2-3分钟。
4）向每个离心管中加入500μL无菌不含抗生素的LB 或SOC培养基中，37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟，使 质粒上氨苄抗性基因表达，菌体复苏。
5）吸取 200μL 已转化的感受态细胞，加到含氨苄青霉素的 LB 或 SOC 固体平板上，用无菌涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃培 养箱里直至液体完全吸收，倒置培养 12-16 小时。
6） PCR 检测，利用试剂盒自带的高速PCR 扩增试剂 2×FastTaq Mast Mix 直接进行菌落PCR 鉴定。
