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产品名称：克罗诺杆菌 PCR 检测试剂盒
英文名称：PCR Detection Kit for Cronobacter spp.
产品编号与包装规格：
| 编号 | 规格 |
|---|---|
| KJD08P | 24 测试/盒 |
产品简介：本试剂盒基于 PCR 技术，依据国家标准 《GB 4789.40-2024 食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌检验》检验要求设计，适用于食品样本中克罗诺杆菌的检测。
克罗诺杆菌 PCR 检测试剂盒检测原理：利用克罗诺杆菌属ITS基因的特异性引物和PCR反应所需试剂，如反应缓冲液、Taq DNA 聚合酶和dNTPs等，加入待检核酸样品，即可进行 PCR 扩增反应。扩增产物电泳后在目标位置处检测到特异性条带时，即为阳性结果。
产品特点：
1. 快速简便：将酶、引物等反应组分混匀后 进行干粉化处理，增加试剂稳定性，使用 时减少溶液配制步骤，更为便捷，整个检 测反应可在 2 h 内完成；
2. 特异性高：根据《 GB 4789.40−2024 食品微生物学检验 克罗诺杆菌检验》提供的目标基因引物，经过大量的标准菌株的反复验证，保证扩增反应的高度特异性；
3. 判读简单：扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和成像仪观察目标条带即可判别，直观方便。
克罗诺杆菌 PCR 检测试剂盒产品组分：
| 组分名称 | 规格 × 数量 |
|---|---|
| 干粉试剂 | 8 管×3 排 |
| 复溶液 | 1 mL×1 管 |
| 阳性对照 | 1管（冻干型） |
| 阴性对照 | 1管（冻干型） |
| 裂解液 | 1 mL × 1 管 |
| 超纯水 | 1 mL × 1 管 |
| 6 × Loading buffer | 240 μL × 1 管 |
| 说明书 | 1 份 |
储存条件与保质期：2~8℃条件下储存，有效期 12 个月。
所需其他材料和适用仪器：
1. PCR 仪器、高速离心机、电泳仪、水平电 泳槽、紫外仪、移液器、移液枪头及离心 管等；
2. 琼脂糖、溴化乙锭(EB)或其他核酸染料。
克罗诺杆菌 PCR 检测试剂盒使用指南：
1，样品前处理
1) 参照 《GB 4789.40−2024》,从克罗诺杆菌定性检测步骤5.3开始，使用 1 μL 接种环刮取TSA琼脂平板上可疑菌落，悬浮到含 30 μL 裂解液的无菌离心管中，充分悬浮菌体，轻弹管壁消除气泡，99℃加热 10 min；
2) 12000 r/min 离心 15 min，上清即为粗提 的 DNA，可转移至 0.2 mL 无菌离心管中， 在-20℃下可长期保存。也可用等效商品化的细菌基因组DNA提取试剂盒或全自动核酸提取仪按操作要求提取DNA模板。
2，加样、反应
1) 首次使用时，分别加入80 μL 超纯水至阳性对照和阴性对照管中,充分溶解，4℃保藏时间不超过 48 h，-20℃存储待用；
2) 取出冻干粉试剂，按照需求剪取 n 个检测试剂管(n=待检测样品数+1 管阳性对照+1 管阴性对照)，每管加入18 μL 复溶液，充分溶解后待用；
3) 向上述已加入复溶液的 n 个反应管中分 别加入待测样品核酸、阴性对照、阳性对 照各 2 μL ，紧盖后置于 PCR 仪中按设定 的反应程序进行扩增反应；
4) PCR 反应程序如下：
3，结果判读：反应后每管中加入4 μL的 6×Loading buffer，混匀，并取 8 μL 样品经1.5%琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像仪下观察，阴性对照无目的条带扩增，阳性对照中出现一条目标条带，大小为282 bp (参照图 1)，PCR 试验结果成立。若阴阳性对照管反应结果不符，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。
克罗诺杆菌 PCR 检测试剂盒使用注意事项：
1. PCR 实验室区域设计、工作基本原则及 注意事项应参照《疾病预防控制中心建设 标准》(建标 127−2009) 和国家卫生和计划生育委员会(原卫生部)(2010)《医疗机构临床基因扩增管理办法》附录(医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则)。
使用本试剂盒前请仔细阅读本说明书全文，检测过程中建议穿洁净工作服，戴一次性手套，使用的移液枪头需提前灭菌；
3. 干粉检测试剂在使用前低速离心，确保所 有的干粉沉在管底，加入复溶液如产生气泡用手指轻弹管壁清除，反应前检查反应 管是否盖紧，避免泄露造成污染；
4. 试剂盒中反应管材质为聚丙烯，包装盒材 质是纸，使用完毕废弃时按照医疗废弃物 相关规定处理，由使用者自行负责处理；
5. 不同批号的产品请勿混合使用，请在有效 期内使用试剂盒，由于操作不当引起的误 判，以及由此误判引发的其他事项，本公 司概不负责。
