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071770 副溶血性弧菌细菌生化鉴定盒(15种×5次)
一)整套试剂及用品
鉴定生化反应的10种试剂(表1)、10瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶0.5 McFarland的浊度管、10支一次性吸管。
二)西林瓶的使用方法
开启西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开铝盖，撕开铝盖，打开西林瓶胶塞(如图1)。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
三)副溶血性弧菌生化鉴定盒的详细使用方法
副溶血性弧菌为革兰氏阴性无芽胞杆菌，易呈多形态，有棒状、弧状、卵圆状、球状、丝状等，排列不规则，一般大小为0.3～0.7µm×1～2µm，单端一根鞭毛，有动力，运动活泼，两端浓染，在固体培养条件下能生长周鞭毛。菌落常为隆起，圆形，稍浑浊不透明，表面光滑，湿润，不产生色素。
挑取平板分离的可疑菌落划线接种3%NaCl胰蛋白胨大豆琼脂平板35－37℃培养18－24h，革兰氏染色镜检，并将新鲜菌苔置于已配备的无菌生理盐水中，与0.5 McFarland的浊度管比浊，将菌悬液制备成0.5McFarland ( 约108cfu/mL )，用吸管吸取2滴（约0.06mL）菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞，一般采用全加塞（如图2左两瓶所示），特殊情况在下表注明采用半加塞（如图2右两瓶所示），直立于内托的凹槽内（如图2），或放置于合适的瓶架中，于35－37℃培养箱中培养，结果观察见表1。
注意：如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式，请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
表一
|
产品名称 |
结果判定 |
结果观察 时间（小时） |
使用说明 | |
|
阳性 |
阴性 | |||
|
氧化酶试剂 |
蓝紫色 |
不变色 |
30秒内 | 滴加1滴试剂到一小块洁净滤纸上，以刚刚浸湿为宜；用玻棒或接种环（铂或塑料）挑取适量新鲜菌苔涂在纸片上。 |
|
3％NaCl半固体 |
扩散生长 |
无扩散生长 |
24—48 | 用接种针挑取新鲜菌苔穿刺接种，竖立培育。 |
|
无盐胨水、3％NaCl胨水、6％NaCl胨水、8％NaCl水、10％NaCl胨水 |
生长 |
不生长 |
24 |
|
|
3%NaCl甘露醇、 3％NaCl蔗糖 3％NaCl乳糖 |
黄色 |
紫色 |
8－24 |
|
|
3％NaCl葡萄糖（产气） |
黄色，小倒管有气泡 |
紫色，小倒管无气泡 |
18—24 | 使用前先确定倒管内无气泡。 |
|
3%NaCl赖氨酸脱羧酶
|
试验管绿色或黄绿色，对照管变黄 | 试验管与对照管均变黄 |
18－24 | 每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支，并加灭菌液体石蜡3－4滴覆盖培养基表面。培养18－24小时，未见阳性结果，继续培养4天，再做最终结果判定。 |
|
3%NaCl 葡萄糖磷酸盐胨水（V-P） |
红色 |
不变色 |
48 | 接种培养后依次加入8滴VP试剂甲液及4滴乙液，混匀，再培养10－20分钟观察结果。 |
|
β－半乳糖苷（ONPG） |
深黄色 | 淡黄色或无色 |
12－24 |
|
备注：本鉴定盒是按照澳门·威斯尼斯网站产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。
四）副溶血性弧菌的生化特性见表2
表2 副溶血性弧菌的生化性状
试验项目 | 结果 |
革兰氏染色镜检 | 阴性，无芽胞，呈棒状、弧状、卵圆状 |
氧化酶 | + |
3%NaCl半固体 | 穿刺接种处扩散生长，有动力 |
无盐胨水 | －或微弱生长 |
8% NaCl胨水 | + |
10％NaCl胨水 | －或微弱生长 |
蔗糖 | - |
乳糖 | - |
葡萄糖 | + |
分解葡萄糖（产气） | - |
甘露醇 | + |
赖氨酸脱羧酶 | + |
硫化氢 | - |
V-P | － |
ONPG | － |
表3 副溶血性弧菌主要性状与其他弧菌的鉴别（必要时做，本鉴定盒没有提供整套相应的生化管，需另买单盒)
|
名称 |
氧化酶 |
赖氨酸 |
精氨酸 |
鸟氨酸 |
明胶 |
脲酶 |
V ︱P |
|
蔗糖 |
D︱纤维二糖 |
乳糖 |
阿拉伯糖 |
D︱甘露糖 |
D︱甘露醇 |
ONPG | 嗜盐性试验 NaCl含量（％） | ||||
|
0 |
3 |
6 |
8 |
10 | ||||||||||||||||
|
副溶血性弧菌 |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
V |
－ |
＋ |
－ |
V |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
|
创伤弧菌 |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
V |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
|
溶藻弧菌 |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
|
霍乱弧菌 |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
V |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
|
拟态弧菌 |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
|
河弧菌 |
＋ |
－ |
＋ |
－ |
＋ |
－ |
－ |
V |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
V |
－ |
|
弗氏弧菌 |
＋ |
－ |
＋ |
－ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
＋ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
|
梅氏弧菌 |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
－ |
＋ |
V |
＋ |
－ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
＋ |
－ |
＋ |
＋ |
V |
－ |
|
霍利斯弧菌 |
＋ |
－ |
－ |
－ |
－ |
－ |
－ |
nd |
－ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
注：nd 表示未试验;V表示可变。
