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细菌新型生化鉴定管使用说明
―― 070040 大肠埃希氏菌O157:H7生化鉴定盒(12种×10次)管
一)大肠埃希氏菌O157:H7生化鉴定盒 整套试剂及用品
鉴定生化反应的12种试剂及配套试剂5种(表1)、0.85%无菌生理盐水10瓶、0.5 McFarland的浊度管1瓶、一次性吸管10支。
二)生化管的使用方法
开启西林瓶前,用75%酒精棉消毒西林瓶表面,在无菌条件下,按铝盖上的箭头方向打开铝盖,撕开铝盖,打开西林瓶胶塞(如图1)。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
三)大肠埃希氏菌O157:H7生化鉴定盒的详细使用方法
将疑是大肠埃希氏菌O157:H7的新鲜菌苔置于已配备的无菌生理盐水中,与0.5 McFarland的浊度管比浊,将菌悬液制备成0.5McFarland ( 约108cfu/mL ), 37℃培养18-24h,用吸管吸取2滴(约0.06mL)菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞,一般采用全加塞(如图2左两瓶所示),特殊情况在下表注明采用半加塞(如图2右两瓶所示),直立于内托的凹槽内(如图2),或放置于合适的瓶架中,于35-37℃培养箱中培养,结果观察见表1。注意:如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式,请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
表1 | |||||
产品名称 | 结果判定 | 培养时间(小时) | 使用说明 | ||
阳性 | 阴性 | ||||
山梨醇 | 黄色 | 紫色 | 18-24 | ||
纤维二糖 | |||||
棉子糖 | |||||
蛋白胨水 | 红色 | 不变色 | 24 | 培养后加靛基质试剂2-3滴,立即观察结果。 | |
西蒙氏柠檬酸盐 | 蓝色 | 不变色 | 24-48 | 西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)用接种针挑取新鲜菌苔在斜面上划“之”字形接种,竖立培育。 | |
鸟、赖氨酸脱羧酶 | 试验管蓝绿色,对照管变 | 试验管与对照管均变黄 | 18-24 | 每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支,并加灭菌液体石蜡5-8滴覆盖培养基表面。培养18-24小时,未见阳性结果,继续培养48小时,再做最终结果判定。 | |
半固体琼脂 | 扩散生长 | 无扩散生长 | 24-48 | 用接种针挑取新鲜菌苔穿刺接种,竖立培育。 | |
三糖铁琼脂 | 产气 | 有气泡 | 无气泡 | 24 | 西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)用接种针挑取新鲜菌苔穿刺,穿刺完毕后在斜面上划“之”字形接种,竖立培育。 |
分解蔗糖、(或)乳糖 | 斜面和底层变黄色 | 不变色 | |||
分解葡萄糖 | 底层变黄,斜面不变色或者红色加深 | 不变色 | |||
产H2S | 变黑色 | 不变色 | |||
葡萄糖磷酸盐胨水 | MR | 红色 | 不变色 | 24-48 | 培养后加MR试剂2-3滴,立即观察结果。 |
VP | 红色 | 不变色 | 48 | 培养后依次加入10滴VP试剂甲液及4滴乙液,混匀,再培养10-20分钟观察结果。 | |
备注:本鉴定盒是按照澳门·威斯尼斯网站产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。 |
四)大肠埃希氏菌O157:H7的生化鉴定程序(见下图)和生化鉴定特征(见表2)
凡符合上述大肠埃希氏菌O157:H7生化反应的纯菌落,经用抗E.coli O157:H7标准血清或EHEC O157:H7乳胶凝集试剂测试呈阳性结果,即可报告为该食品试样中检出大肠埃希氏菌O157:H7。